T 2 代共表达ZxNHX1-ZxVP1-1转基因紫花苜蓿抗旱耐盐性评价及ZxNHX1和PcCLCg对紫花苜蓿的聚合转化

发布时间：2022-02-22 01:09

　　紫花苜蓿（Medicago sativa）在我国西北干旱和半干旱地区生态环境建设和畜牧业发展上具有重要的作用,但由于其耐盐抗旱性较弱在该地区很难获得高产。而将优良抗逆基因导入紫花苜蓿中以改良其抗逆性,是现阶段常用的育种手段。多浆旱生植物霸王（Zygophyllum xanthoxylum）通过吸收生境中的Na⁺并将其区域化至叶片液泡中来抵御逆境胁迫。本课题组前期克隆了其体内调控Na⁺区域化的液泡膜Na⁺/H⁺逆向转运蛋白和为其提供质子驱动力的H⁺-PPase编码基因ZxNHX1和ZxVP1-1,并将它们共转化入紫花苜蓿中,T₀和T₁代转基因紫花苜蓿的耐盐抗旱性均显著增强。本研究进一步评估T₂代共表达ZxNHX1-ZxVP1-1转基因紫花苜蓿的抗旱耐盐性,以期为今后的推广和应用提供一定的理论依据。此外,课题组还发现另一耐氯植物沙芥（Pugionium cornutum）可以吸收大量Cl^-于地上... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省211工程院校985工程院校教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 引言
第二章 国内外研究进展
    2.1 Na~+/H~+逆向转运蛋白研究进展
        2.1.1 Na~+/H~+逆向转运蛋白
        2.1.2 Na~+/H~+逆向转运蛋白的功能
    2.2 液泡膜H~+-PPase蛋白研究进展
        2.2.1 液泡膜H~+-PPase蛋白
        2.2.2 液泡膜H~+-PPase的功能
    2.3 Cl-通道蛋白研究进展
        2.3.1 Cl~-通道蛋白
        2.3.2 Cl~-通道蛋白的功能
    2.4 紫花苜蓿遗传转化研究进展
        2.4.1 基因型的选择
        2.4.2 外植体的选择
        2.4.3 农杆菌菌株的选择
        2.4.4 表达载体的选择
        2.4.5 转化方案的选择
第三章 T_2代共表达ZxNHX1-ZxVP1-1转基因紫花苜蓿抗旱耐盐性评价
    3.1 材料与方法
        3.1.1 试验材料
        3.1.2 处理方法
        3.1.3 测定指标及方法
        3.1.4 数据分析
    3.2 结果与分析
        3.2.1 T_2代转基因紫花苜蓿具有较强的耐盐性
        3.2.2 T_2代转基因紫花苜蓿具有较强的抗旱性
        3.2.3 T_2代转基因紫花苜蓿的相对生长速率高于野生型
        3.2.4 T_2代转基因紫花苜蓿维持了较高的保水性能
        3.2.5 T_2代转基因紫花苜蓿的光合性能优于野生型
        3.2.6 T_2代转基因紫花苜蓿根系活力显著高于野生型
    3.3 讨论
第四章 植物表达载体的构建
    4.1 .材料与方法
        4.1.1 载体与菌株
        4.1.2 酶、抗生素与各类试剂盒
        4.1.3 培养基与抗生素的配制
        4.1.4 引物设计与合成
        4.1.5 扩增片段体系与程序
        4.1.6 扩增片段凝胶电泳与回收
        4.1.7 质粒提取方法
        4.1.8 质粒与PCR产物的酶切连接或In-Fusion连接
        4.1.9 进行大肠杆菌转化及阳性菌液检测
        4.1.10 植物表达载体构建图谱
        4.1.11 对农杆菌EHA105的转化
    4.2 结果与分析
        4.2.1 Bar基因导入pCAMBIA1302表达载体中
        4.2.2 ZxNHX1-HA导入对照载体中
        4.2.3 将pGmUbi启动子-目的基因-NOS终止子导入35s::ZxNHX1-HA载体中
    4.3 讨论
第五章 紫花苜蓿抗性植株的获得与分子鉴定
    5.1 材料与方法
        5.1.1 紫花苜蓿植株、农杆菌菌株和植物表达载体
        5.1.2 培养基以及激素等的配制
        5.1.3 农杆菌的活化以及紫花苜蓿遗传转化体系的过程
        5.1.4 转基因植株的分子检测
    5.2 结果与分析
        5.2.1 紫花苜蓿的遗传转化与抗性植株获得
        5.2.2 转基因植株的检测
    5.3 讨论
第六章 结论
参考文献
在学期间的研究成果
致谢



本文编号：3638382