胭脂鱼BAFF基因的克

发布时间：2022-02-22 16:44

　　胭脂鱼（Myxocyprinus asiaticus）属鲤形目（Cypriniformes）胭脂鱼科（Catostomidae）,仅分布于我国长江和闽江,是我国特有的淡水珍稀物种。胭脂鱼体型奇特、色彩绚丽、味道鲜美,具有很高的观赏和食用价值。胭脂鱼是我国长江流域的重要经济鱼类,但是由于近些年人类活动的频繁导致其数量骤降,其生境一度面临着严峻的挑战,通过科学的人工繁殖放流已使得其数量得到稳步的回升。人工繁殖成为保护胭脂鱼这一种群的重要途径。但是随着人工养殖规模的扩大,其面临的病害也随之增加,造成较高的死亡率,这是目前胭脂鱼人工养殖中面临的一大困境。我们试图从胭脂鱼的免疫系统中的细胞因子入手,希望为解决胭脂鱼人工繁殖中存在的困境提供理论依据和解决措施。细胞因子是一群相对分子量较小的蛋白,活性极高,产生的时间短暂,通常通过自分泌或旁分泌的形式发挥作用。细胞因子作为免疫系统中一类重要的传导信号的分子,是免疫细胞间信号网络的组成部分,在炎症反应、防御病毒感染、特异性T、B细胞克隆的增殖及其功能等方面起作用。肿瘤坏死因子配体超家族在调节免疫反应中起到了关键作用,这些配体中的大多数是典型的Ⅱ型跨膜蛋... 

【文章来源】：西南大学重庆市211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第1章 文献综述
    1.1 BAFF的研究进展
        1.1.1 BAFF的结构与分布
        1.1.2 BAFF的受体及信号转导
        1.1.3 BAFF与相关疾病
        1.1.4 BAFF在鱼类中的研究进展
    1.2 鱼类细胞因子的研究进展
    1.3 细胞因子类药物的研究进展
    1.4 胭脂鱼的研究现状
    1.5 研究的目的与意义
    1.6 研究内容
第2章 胭脂鱼BAFF基因的克隆与生物信息学分析
    2.1 引言
    2.2 实验材料和仪器
        2.2.1 实验动物
        2.2.2 实验菌株
        2.2.3 实验试剂与器材
    2.3 实验方法
        2.3.1 脾脏总RNA的提取与cDNA的合成
        2.3.2 大肠杆菌Top10感受态细胞的制备
        2.3.3 胭脂鱼BAFF分子核心序列的扩增
        2.3.4 RACE-PCR扩增3′和5′核苷酸序列
        2.3.5 胭脂鱼BAFF全长拼接
        2.3.6 胭脂鱼BAFF序列的生物信息学分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 胭脂鱼BAFFcDNA全长
        2.4.2 胭脂鱼BAFFcDNA生物信息学分析结果
    2.5 讨论
第3章 胭脂鱼BAFF表达模式研究
    3.1 引言
    3.2 实验材料和仪器
        3.2.1 实验动物
        3.2.2 实验菌株
        3.2.3 实验试剂及仪器
        3.2.4 有关试剂的配制
    3.3 实验方法
        3.3.1 胭脂鱼BAFF组织分布和发育时期检测
        3.3.2 原位杂交分析胭脂鱼外周血白细胞BAFF的表达
        3.3.3 嗜水气单胞菌感染后对胭脂鱼BAFF和IgM表达变化的影响
    3.4 实验结果
        3.4.1 GAPDH、β-actin、L18a、18srRNA四个候选内参基因的稳定性评估
        3.4.2 胭脂鱼BAFF组织表达分析
        3.4.3 胭脂鱼BAFF早期发育阶段检测
        3.4.4 原位杂交分析胭脂鱼外周白细胞BAFF表达结果
        3.4.5 嗜水气单胞菌感染后BAFF和IgM表达变化情况
    3.5 讨论
第4章 胭脂鱼BAFF重组蛋白的表达、纯化和功能检测
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验菌株和载体
        4.2.2 实验试剂及仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 RT-PCR扩增MasBAFF基因及PCR产物的回收和鉴定
        4.3.2 重组表达质粒的构建
        4.3.3 重组蛋白的表达、纯化与鉴定
        4.3.4 胭脂鱼BAFF重组蛋白的功能检测
    4.4 实验结果
        4.4.1 SDS-PAGE分析鉴定诱导表达结果
        4.4.2 MasBAFF蛋白与胭脂鱼外周血白细胞的结合
        4.4.3 MasBAFF蛋白对体外培养胭脂鱼外周血白细胞的活性影响
    4.5 讨论
全文结论
参考文献
发表文章
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[2]BAFF受体在人B淋巴瘤细胞中的作用研究[J]. 王永伦,封忠昕,葛晓军.  中国现代医学杂志. 2017(20)
[3]B细胞刺激因子相关疾病及其抑制剂的研究进展[J]. 吴海涛,宋毅荣,卢楠,叶嘉鹏,戴佳韵,姚韵.  中国新药与临床杂志. 2015(08)
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[5]实时定量PCR构建法夫酵母内参基因β-actin、gpd、18S rRNA标准品质粒和标准曲线[J]. 李天丽,郑晨华,李利君,倪辉,蔡慧农.  激光生物学报. 2013(04)
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[8]实时荧光定量PCR中内参基因的选择[J]. 赵文静,徐洁,包秋华,陈永福,张和平.  微生物学通报. 2010(12)
[9]内参基因在实时定量PCR中应用的研究进展[J]. 董晓丽,王加启,卜登攀,张春林,李珊珊,赵国琦.  中国畜牧兽医. 2009(09)
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硕士论文
[1]条纹斑竹鲨和鲫鱼BAFF基因的克隆和性质分析[D]. 庞书英.南京师范大学 2011
[2]BAFF受体TACI融合蛋白的表达纯化与功能研究[D]. 孟祥斌.天津大学 2010
[3]B细胞刺激因子受体（BAFF-R）的基因克隆、表达与功能研究[D]. 田侠.河北大学 2006
[4]重组人可溶性B淋巴细胞刺激因子的制备及功能鉴定[D]. 高会广.第三军医大学 2003



本文编号：3639849