利用CRISPR/Cas9技术构建Gqi9基因敲入的HEK293细胞系

发布时间：2022-08-01 14:20

　　G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors,GPCRs）是最大的膜表面受体家族,人类基因组有800多个GPCRs蛋白编码基因。GPCR介导的信号通路参与调控人类多种生理过程,GPCR功能失调与多种疾病的发生密切相关,因此该受体家族是非常重要的药物靶点。GPCR被激活后可以偶联不同G蛋白介导经典的G蛋白依赖信号通路,G蛋白的激活会导致胞内产生第二信使,从而引发细胞内一系列生化反应。G蛋白分为4大类:Gs、Gi/o、Gq/11、G12/13。其中Gs和Gq/11亚型被激活后,分别会引起胞内第二信使cAMP、Ca²⁺浓度的升高,与之相反,Gi蛋白的激活会抑制腺苷酸环化酶活性,导致cAMP水平下降,但该信号无法直接进行检测,使Gi蛋白偶联受体相关研究相对繁琐。Gqi9蛋白是将Gq蛋白α亚基C端的9个氨基酸替换为Gi蛋白相对应的氨基酸,以此改变了G蛋白偶联GPCR的特异性,该嵌合体蛋白既可以被偶联Gi蛋白的受体激活,也可以介导Gq蛋白下游信号通路。Gqi9蛋白的出现为Gi蛋白偶联受体研究提供了有效的工具,目前都是采用Gqi9蛋白与受体共同转染的方... 

【文章页数】：49 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

GPCR下游效应蛋白及其在HEK293细胞内的表达

哺乳动物G蛋白α亚基同源性

G蛋白的激活与失活循环示意图

【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR/Cas9技术在基因功能研究中的应用[J]. 周芮,张辟.  生物化工. 2019(01)



本文编号：3667609