全血直扩ApoE基因分型方法的建立及临床应用研究
发布时间：2022-08-10 10:56
载脂蛋白E（ApoE）是一种多态性蛋白,参与脂蛋白的转化与代谢过程,研究报道ApoE基因多态性和阿尔兹海默症、动脉粥样硬化、降脂药的代谢都有着密切关系。目前ApoE基因分型方法如测序、聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性、聚合酶链式反应-单链构象多态性等,检测成本高、耗时长、操作复杂,有时需要大型仪器设备的投入,使这些方法在临床上的应用受到一定限制。本研究针对ApoE基因的特定引物设计,结合突变扩增阻滞系统和侧向流层析平台,建立了一种使用全血直接作为模板进行PCR扩增的基因分型方法,并通过配套的读卡仪实现了数字化检测。全血样本加处理液即可直接用于PCR扩增,扩增完成后结合读卡仪5分钟就可以判读检测结果。该方法无需DNA提取,整个实验过程90分钟完成,灵敏度为1 ng的DNA。收集50例临床样本,用本研究所建立的方法和测序法分别进行检测,两种方法的符合率为100%,说明本方法准确率高。选取35例特殊的临床患者（包括高胆红素、高胆固醇、高甘油三酯、溶血样本、低浓度白细胞、高浓度白细胞、血液疾病）的样本进行检测,其检出率为100%,说明全血直扩的ApoE基因检测方法不受相关干扰因素的影响。通...
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语对照表
第一章 绪论
1.1 ApoE基因
1.2 ApoE基因和疾病的关系
1.2.1 ApoE基因多态性和阿尔茨海默症
1.2.2 ApoE基因多态性和动脉粥样硬化
1.2.3 ApoE基因多态性和缺血性脑卒中
1.2.4 ApoE基因多态性和药物代谢及其他疾病的关联
1.3 SNP基因分型技术
1.4 直扩PCR技术概述
1.4.1 直扩PCR技术
1.4.2 直扩PCR技术的进展
1.4.3 直扩PCR技术的瓶颈
1.5 论文立题依据和主要工作
1.5.1 立题意义
1.5.2 研究内容
1.5.3 主要创新点
第二章 ApoE基因阳性质控体系的建立
2.1 实验原理
2.2 实验材料
2.2.1 实验试剂及仪器
2.2.2 试剂的配制
2.3 实验方法与结果
2.3.1 克隆引物的设计及合成
2.3.2 目的DNA片段的制备
2.3.3 目的片段克隆
2.3.4 测序验证
2.4 本章小结
第三章 全血直扩的ApoE基因分型方法的建立
3.1 实验原理
3.2 实验仪器、材料与试剂
3.2.1 实验仪器
3.2.2 实验材料与试剂
3.3 实验方法
3.3.1 特异性引物的设计及筛选
3.3.2 特异性产物的初步获取
3.3.3 全血样本的处理
3.3.4 PCR反应体系的优化
3.3.5 PCR扩增体系的优化
3.4 结果与分析
3.4.1 特异性引物的设计及筛选
3.4.2 全血样本的处理
3.4.3 PCR反应体系的优化
3.4.4 PCR扩增体系的优化
3.4.5 最终确定的反应体系
3.5 本章小结
第四章 读卡仪判读基因型的研究
4.1 实验原理
4.2 仪器及样本
4.3 实验方法
4.3.1 检测流程及结果判读流程
4.3.2 参数确定
4.4 结果与分析
4.5 本章小结
第五章 性能评估
5.1 实验原理
5.2 实验试剂及仪器
5.2.1 主要试剂
5.2.2 主要仪器
5.3 实验方法
5.3.1 准确性
5.3.2 特异性
5.3.3 灵敏度
5.3.4 批间差
5.4 实验结果
5.4.1 准确性
5.4.2 特异性
5.4.3 灵敏度
5.4.4 批间差
5.5 本章小结
第六章 临床应用研究
6.1 实验原理
6.2 实验试剂及仪器
6.2.1 主要试剂
6.2.2 主要仪器
6.3 实验方法
6.3.1 临床样本对该方法的评价
6.3.2 特殊干扰样本对该方法的评价
6.3.3 ApoE基因多态性与缺血性脑卒中相关性研究
6.4 实验结果
6.4.1 临床样本验证结果
6.4.2 特殊干扰样本的检测结果
6.4.3 关联分析结果
6.5 本章小结
全文总结
参考文献
攻读硕士学位期间取得的科研成果
致谢
本文编号：3673510
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语对照表
第一章 绪论
1.1 ApoE基因
1.2 ApoE基因和疾病的关系
1.2.1 ApoE基因多态性和阿尔茨海默症
1.2.2 ApoE基因多态性和动脉粥样硬化
1.2.3 ApoE基因多态性和缺血性脑卒中
1.2.4 ApoE基因多态性和药物代谢及其他疾病的关联
1.3 SNP基因分型技术
1.4 直扩PCR技术概述
1.4.1 直扩PCR技术
1.4.2 直扩PCR技术的进展
1.4.3 直扩PCR技术的瓶颈
1.5 论文立题依据和主要工作
1.5.1 立题意义
1.5.2 研究内容
1.5.3 主要创新点
第二章 ApoE基因阳性质控体系的建立
2.1 实验原理
2.2 实验材料
2.2.1 实验试剂及仪器
2.2.2 试剂的配制
2.3 实验方法与结果
2.3.1 克隆引物的设计及合成
2.3.2 目的DNA片段的制备
2.3.3 目的片段克隆
2.3.4 测序验证
2.4 本章小结
第三章 全血直扩的ApoE基因分型方法的建立
3.1 实验原理
3.2 实验仪器、材料与试剂
3.2.1 实验仪器
3.2.2 实验材料与试剂
3.3 实验方法
3.3.1 特异性引物的设计及筛选
3.3.2 特异性产物的初步获取
3.3.3 全血样本的处理
3.3.4 PCR反应体系的优化
3.3.5 PCR扩增体系的优化
3.4 结果与分析
3.4.1 特异性引物的设计及筛选
3.4.2 全血样本的处理
3.4.3 PCR反应体系的优化
3.4.4 PCR扩增体系的优化
3.4.5 最终确定的反应体系
3.5 本章小结
第四章 读卡仪判读基因型的研究
4.1 实验原理
4.2 仪器及样本
4.3 实验方法
4.3.1 检测流程及结果判读流程
4.3.2 参数确定
4.4 结果与分析
4.5 本章小结
第五章 性能评估
5.1 实验原理
5.2 实验试剂及仪器
5.2.1 主要试剂
5.2.2 主要仪器
5.3 实验方法
5.3.1 准确性
5.3.2 特异性
5.3.3 灵敏度
5.3.4 批间差
5.4 实验结果
5.4.1 准确性
5.4.2 特异性
5.4.3 灵敏度
5.4.4 批间差
5.5 本章小结
第六章 临床应用研究
6.1 实验原理
6.2 实验试剂及仪器
6.2.1 主要试剂
6.2.2 主要仪器
6.3 实验方法
6.3.1 临床样本对该方法的评价
6.3.2 特殊干扰样本对该方法的评价
6.3.3 ApoE基因多态性与缺血性脑卒中相关性研究
6.4 实验结果
6.4.1 临床样本验证结果
6.4.2 特殊干扰样本的检测结果
6.4.3 关联分析结果
6.5 本章小结
全文总结
参考文献
攻读硕士学位期间取得的科研成果
致谢
本文编号：3673510
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3673510.html
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