BdJHAMT参与桔小实蝇幼虫生长发育的功能解析

发布时间：2022-09-28 20:20

　　桔小实蝇Bactrocera dorsalis（Hendel）是一种危险性果蔬害虫,常见于热带及亚热带地区,其食性广,适应能力强,已被多个地区和国家当作检疫性害虫而加以隔离,对国际贸易造成了诸多限制。目前,桔小实蝇的防控以化学药剂为主,然而幼虫一旦在果内产卵危害,药剂喷洒难以奏效,同时将导致严重的环境污染和食品安全问题。因此,发掘绿色、安全的新型药剂作用靶标势在必行。保幼激素（Juvenile hormone,JH）在昆虫的生长发育、变态、生殖等生理过程中均发挥重要作用。保幼激素酸甲基转移酶（Juvenile hormone acid O-methyl-transferase,JHAMT）是保幼激素合成过程中重要的调控酶。本研究以桔小实蝇基因组及转录组数据为基础,克隆获得了BdJHAMT和BdJHAMT-like的开放阅读框序列,明确了BdJHAMT和BdJHAMT-like与其他昆虫同源序列的系统进化关系;并利用qPCR解析了BdJHAMT和BdJHAMT-like的时空表达模式,基于免疫组化开展了BdJHAMT的组织定位;采用高效液相色谱技术,明确了桔小实蝇各发育阶段的JH Ⅲ滴度... 

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
文献综述
    1 桔小实蝇的危害及生活史
    2 昆虫保幼激素(Juvenile hormone, JH)
        2.1 天然 JH 及 JH 类似物(JH mimics, JHM)
        2.2 保幼激素(JH)的生物合成途径
    3 保幼激素(JH)合成通路关键基因
        3.1 保幼激素酸甲基转移酶(Juvenile hormone acid methyltransferase,JHAMT)
        3.2 法尼酸甲基转移酶(Faenesoic acid O-methyltransferase,FAMeT)
        3.3 CYP15家族
引言
第一章 桔小实蝇BdJHAMT基因的克隆及序列分析
    1 材料和方法
        1.1 供试虫源
        1.2 试验主要试剂和仪器
        1.3 样品总RNA提取
        1.4 总RNA中基因组DNA去除
        1.5 第一链cDNA的合成
        1.6 引物设计与合成
        1.7 PCR扩增
        1.8 目的片段克隆与测序
        1.9 系统发育树建立
    2 结果与分析
        2.1 BdJHAMT序列生物信息学分析
        2.2 BdJHAMT氨基酸序列结构及其系统发育分析
    3 讨论与小结
第二章 桔小实蝇BdJHAMT的时空表达模式与JH滴度谱解析
    1 材料和方法
        1.1 供试虫源
        1.2 试验主要试剂和仪器
        1.3 抗体制备
        1.4 试虫样品准备
        1.5 样品总RNA提取
        1.6 总RNA中基因组DNA去除
        1.7 第一链cDNA的合成
        1.8 特异性定量引物设计与合成
        1.9 实时荧光定量PCR
        1.10 HPLC检测
        1.11 免疫组化分析
    2 结果与分析
        2.1 BdJHAMT和 BdJHAMT-like在桔小实蝇不同发育阶段的表达模式
        2.2 BdJHAMT和 BdJHAMT-like在桔小实蝇不同组织的表达模式
        2.3 JHⅢ滴度标准曲线的建立
        2.4 桔小实蝇JHⅢ滴度检测与滴度谱建立
        2.5 BdJHAMT在桔小实蝇中的组织定位
    3 讨论与小结
第三章 BdJHAMT参与桔小实蝇生长发育的功能探究
    1 材料和方法
        1.1 供试虫源
        1.2 试验主要试剂和仪器
        1.3 RNAi
        1.4 表型观察
        1.5 烯虫酯处理
        1.6 数据分析
    2 结果与分析
        2.1 干扰BdJHAMT和 BdJHAMT-like对桔小实蝇雌虫产卵量的影响
        2.2 干扰BdJHAMT对桔小实蝇幼虫生长进度的影响
        2.3 烯虫酯处理对RNAi后桔小实蝇幼虫生长进度的影响
    3 讨论与小结
第四章 主要结果及研究展望
    1 主要结果
        1.1 克隆获得了桔小实蝇BdJHAMT的开放阅读框序列
        1.2 解析了BdJHAMT的时空表达模式及其组织定位
        1.3 明确了桔小实蝇JHⅢ滴度谱
        1.4 探究了BdJHAMT在桔小实蝇中的生理表型变化
    2 研究展望
参考文献
在读期间发表论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]麦红吸浆虫保幼激素含量测定[J]. 李英梅,仵均祥,成卫宁,李怡萍,侯娟娟.  西北农业学报. 2006(04)
[2]用HPLC测定松墨天牛体内的保幼激素[J]. 钱明惠,范军祥,秦长生.  广东林业科技. 2004(02)
[3]鞭角华扁叶蜂保幼激素滴度的动态[J]. 王满囷,李周直.  林业科学. 2002(05)
[4]用HPLC测定稻褐飞虱体内的保幼激素[J]. 杨亦桦,戴华国,韩航如,王鸣华.  华东昆虫学报. 1997(02)
[5]用HPLC测定长角血蜱中的保幼激素[J]. 云自厚,杨轶帆,姜在阶,陈湘.  北京师范大学学报(自然科学版). 1992(02)
[6]蓖麻蚕蛹期血淋巴中保幼激素滴度的测定[J]. 王宗舜,郑文惠,郭郛.  科学通报. 1988(15)

硕士论文
[1]基于保幼激素合成酶的生态友好杀虫剂靶标发现[D]. 殷玥.上海应用技术大学 2018



本文编号：3682320