蜂毒肽基因原核表达载体的构建及重组蛋白生物活性作用的研究

发布时间：2022-10-11 13:53

　　本研究根据Genebank中公布的蜂毒肽（melittin）基因序列（NM001011607）,将其插入pGEX6p-1载体,转入BL21（DE3）进行诱导表达并纯化重组蛋白melittin,测定其浓度,采用SDS-PAGE电泳及免疫印迹分析重组蜂毒肽的分子量和活性;进行抑菌试验,以及肿瘤细胞毒性实验,判断重组蜂毒肽的生物活性。重组蛋白经SDS-PAGE和灰度分析在25～35 kDa之间出现一条明显条带;重组蛋白对金黄色葡萄球菌有高度敏性,对大肠埃希菌有中度敏感性,对铜绿假单胞菌和伤寒沙门菌有低度敏感性。5个浓度重组蛋白50、25、12.5、6.25、3.125 mg/L分别作用人乳腺癌MCF-7细胞,在12、24、36、48、72 h时间对人乳腺癌MCF-7细胞生长均有稳定抑制作用,与对照组相比有明显差异（P＜0.05）。蜂毒肽融合蛋白通过pGEX6p-1载体转化到原核细胞进行表达稳定可行,且具有明显抑菌和抗肿瘤的作用。 

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 主要材料与试剂
    1.1 主要试剂
    1.2 试剂盒
    1.3 载体、菌种及细胞
    1.4 主要实验设备
2 方法
    2.1 表达菌株的构建和蛋白诱导条件的优化
    2.2 pGEX6p-melittin表达纯化
    2.3 SDS-PAGE电泳、蛋白浓度分析
    2.4 免疫印迹
    2.5 药敏试验
        2.5.1 表达蛋白液和菌悬液的制备
        2.5.2 抑菌实验
    2.6 抗肿瘤实验
    2.7 统计学处理
3 结果
    3.1 重组蛋白的表达及定位
    3.2 纯化蛋白检测、灰度分析及免疫印迹
    3.3 抑菌试验
    3.4 抗肿瘤作用
4 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]蜂针疗法治疗寒湿型非特异性腰痛的临床效果[J]. 倪珊,刘一畅.  中国当代医药. 2020(08)
[2]抗菌肽抗菌机制及研究热点[J]. 张溪,弓磊.  中国组织工程研究. 2020(10)
[3]大胡蜂蜂毒中多肽和蛋白质结构和功能的多样性[J]. 周思彤,车逸豪,倪连丽,李龙星,袁仕梦,杨自忠,杨志斌,张成桂.  天然产物研究与开发. 2019(09)
[4]蜂毒的主要成分及药理作用的研究进展[J]. 张冰清,刘晓波.  药学研究. 2016(03)
[5]昆虫抗菌肽在医药上的应用[J]. 黄自然,廖富蘋,郑青,黄亚东.  天然产物研究与开发. 2001(02)



本文编号：3690692