银星竹鼠卵巢发育及相关基因表达调控的研究

发布时间：2022-12-11 07:44

　　地下鼠由于常年地下生活,进化出了一系列区别于地面鼠的适应性特征,典型特征是繁殖力下降。动物繁殖对维护种群稳定和物种多样性有重要意义。银星竹鼠（Rhizomys pruinosus）作为一种地下鼠,繁殖力较低,平均胎仔数仅2-4只,是研究地下鼠繁殖调控的理想物种。对卵巢发育规律的研究可为探究银星竹鼠繁殖调控提供理论基础。通过初步探究几个关键时期银星竹鼠卵巢的发育,识别与卵巢发育相关基因和转录组遗传信息,为银星竹鼠及地下鼠的繁殖研究提供基础资料,同时也为探究地下鼠卵巢发育与繁殖力下降的关系奠定理论基础。本研究采用解剖学方法对不同年龄组（两周龄组、一月龄组、三月龄组、性成熟组和怀孕组）银星竹鼠卵巢发育作了研究,同时做转录组测序。在测序结果中筛选差异表达基因（differentially expressed gene,DEG）并对其进行Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）数据库富集,得到显著性最大的两条通路:卵巢类固醇合成通路和肾素血管紧张素系统通路。随后对这两条通路上的差异表达基因进行实时定量PCR（q-PCR）验证。旨在初步揭示银星竹鼠... 

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 地下鼠
    1.2 银星竹鼠生物学特征
    1.3 哺乳动物卵巢结构与功能
        1.3.1 哺乳动物卵巢的结构
        1.3.2 卵巢的排卵功能
        1.3.3 卵泡的分类
        1.3.4 卵巢的内分泌功能
    1.4 卵巢发育两种调控途径
        1.4.1 卵巢类固醇合成通路
        1.4.2 肾素血管紧张素系统
    1.5 测序技术的发展历史
        1.5.1 转录组概述
        1.5.2 转录组测序的重要步骤及流程
    1.6 研究目的与意义
第2章 银星竹鼠卵巢发育
    2.1 研究材料
        2.1.1 研究动物
        2.1.2 研究设备及耗材
        2.1.3 实验材料及试剂
    2.2 研究方法
        2.2.1 动物组织的提取
        2.2.2 石蜡切片的制作
        2.2.3 HE染色
        2.2.4 卵泡大小及数量的测量
    2.3 结果与分析
        2.3.1 不同时期卵巢组织组织学特征
        2.3.2 卵泡计数
        2.3.3 各级卵泡大小测量
    2.4 讨论
第3章 银星竹鼠卵巢转录测序
    3.1 研究材料
        3.1.1 研究动物
        3.1.2 研究设备及耗材
        3.1.3 实验试剂
    3.2 研究方法
        3.2.1 总RNA提取
        3.2.2 总RNA质量检测
        3.2.3 cDNA文库构建
        3.2.4 转录组质控与测序
        3.2.5 Unigene功能注释及表达量分析
        3.2.6 基因结构分析
        3.2.7 差异表达基因筛选
        3.2.8 差异表达基因功能注释和富集分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 总RNA提取结果
        3.3.2 转录组测序与组装结果
        3.3.3 Unigene功能注释
        3.3.4 基因结构分析
        3.3.5 基因表达量分析
        3.3.6 差异表达基因识别
        3.3.7 差异表达基因功能注释分析
        3.3.8 差异表达基因GO功能富集分析
        3.3.9 差异表达基因KEGG通路注释
    3.4 讨论
第4章 卵巢类固醇合成相关基因表达的q-PCR验证
    4.1 研究材料
        4.1.1 研究动物
        4.1.2 研究设备及耗材
        4.1.3 实验试剂
    4.2 研究方法
        4.2.1 cDNA合成
        4.2.2 引物设计
        4.2.3 模板及引物专一性检测
        4.2.4 实时定量PCR验证
        4.2.5 数据分析
    4.3 结果及分析
        4.3.1 模板及引物专一性检测
        4.3.2 类固醇合成相关基因实时定量结果
        4.3.3 Cyplla mRNA的表达
        4.3.4 Cyp17 mRNA的表达
        4.3.5 17β-hsd mRNA的表达
        4.3.6 3β3-hsd mRNA的表达
    4.4 讨论
第5章 肾素血管紧张素系统相关基因表达的q-PCR验证
    5.1 材料与方法
    5.2 结果及分析
        5.2.1 模板及引物专一性检测
        5.2.2 肾素血管紧张素系统相关基因实时定量结果
        5.2.3 Ace mRNA的表达
        5.2.4 Cpa3 mRNA的表达
        5.2.5 Cmal mRNA的表达
        5.2.6 Agt mRNA的表达
        5.2.7 AgtIIr2 mRNA的表达
    5.3 讨论
第6章 总结及展望
参考文献
附录
致谢
攻读硕士学位期间研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]多西环素对慢性间歇缺氧所致的心房重构的改善作用[J]. 张凯,马作旺,刘瑞蒙,徐园园,张跃,袁梦,李广平.  中华老年心脑血管病杂志. 2018(10)
[2]蛹虫草的分子生物学研究进展[J]. 乔宇琛,刘桂君,王平,周思静,郑洁,尚宏忠.  食品科学. 2018(23)
[3]不同干扰荒漠生境中子午沙鼠的繁殖及种群动态特征[J]. 杨素文,袁帅,付和平,包达尔罕,满都呼,叶丽娜,岳闯,武晓东.  动物学杂志. 2017(05)
[4]竹鼠养殖业现状、前景及发展对策[J]. 刘克俊,万火福,张文明,何国庆,王自豪.  广西畜牧兽医. 2017(04)
[5]大方县褐家鼠的种群数量动态及繁殖特征[J]. 赵芳,龙贵兴,李蔚传,彭忠勇.  贵州农业科学. 2015(08)
[6]鼢鼠亚科繁殖特性研究进展[J]. 周延山,花立民,纪维红,楚彬,刘丽.  草业科学. 2015(06)
[7]地下鼠听觉机制研究的进展[J]. 王茁.  陕西教育学院学报. 2011(03)
[8]我国竹鼠养殖现状与发展对策[J]. 刘军,唐朝晖,周笃春,曾庆兵.  湖南环境生物职业技术学院学报. 2011(02)
[9]地下鼠视觉系统对昼夜节律调节研究进展[J]. 孟衫衫,李金钢,林恭华.  四川动物. 2010(05)
[10]如何养殖中华竹鼠[J]. 陈国松,赵秀月,涂利武.  浙江林业. 2009(01)

硕士论文
[1]‘无子瓯柑’小孢子母细胞减数分裂异常的分子机理研究[D]. 朱咪咪.浙江农林大学 2016
[2]银星竹鼠的生物学特性研究[D]. 卓智龙.广西师范大学 2012



本文编号：3718399