CRL E3泛素连接酶中关键基因在肾癌中的作用及机制研究

发布时间：2023-02-16 13:43

　　目的:肾细胞癌(Renal cell carcinoma,RCC)简称肾癌,占全球每年10.2万人死亡的人类恶性肿瘤的3%。根据美国癌症协会(American Cancer Society)的数据,到2018年,预计在65,340例发病病例和14,970例死亡病例中,RCC将占8%。尽管诊断技术不断进步,但约30%的肾癌患者诊断为晚期肾癌,对放疗和化疗的敏感性较低,治疗效果较差,仅有10%到20%的患者对免疫白介素2(Il-2)和干扰素(IFN-type)有效果。因此,寻找准确有效的抗RCC分子治疗靶点,了解其发生的关键分子机制,是制定治疗RCC(肾癌)新策略的关键。泛素化蛋白系统(UPS)通过及时降解多种调控蛋白,实现真核生物细胞的基本功能。作为一种主要的蛋白降解通路,UPS参与了一系列生物过程,例如增殖、分化、凋亡及应激反应。因此,UPS的功能紊乱会破坏蛋白质的降解功能,导致包括癌症在内的多种疾病。UPS的靶向性成为抗癌治疗的热点。而蛋白抑制剂Bortezomib在2008年被FDA批准用于治疗骨髓瘤患者表明UPS抗癌治疗的有效性。但是Bortezmib对正常细胞的毒性限制了它的使...

【文章页数】：85 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
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英文缩略词表
第1章 前言
    1.1 泛素-蛋白酶体系统(UPS)概述
    1.2 CRL通过cullin-基础的RINGE3 连接酶和它们导致的生物过程
        1.2.1 CRL1
        1.2.2 CRL2
        1.2.3 CRL3
        1.2.4 CRL4
        1.2.5 CRL5
        1.2.6 CRL7/CRL9
    1.3 类泛素化
    1.4 RING组成成分SAG或 ROC1 以及NAE为抗癌靶点的可能性
    1.5 肾癌
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要实验仪器设备
        2.1.2 主要实验试剂
        2.1.3 实验试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 细胞克隆形成实验
        2.2.3 ATPLite 细胞增殖实验（ATPLite proliferation assay）
        2.2.4 HE、免疫组织化学染色（HE staining，IHC）
        2.2.5 蛋白免疫印迹（western blot）
        2.2.6 流式细胞检测细胞周期及细胞凋亡
        2.2.7 细胞凋亡检测：DNA-fragmentation检测
        2.2.8 构建质粒（本实验的 SAG，ROC1 质粒均来自 YI Sun 实验室，只构建了 NAE）
        2.2.9 质粒提取
        2.2.10 慢病毒的构建
        2.2.11 慢病毒载体的包装
        2.2.12 慢病毒滴度测定（用 293T 细胞测定）
        2.2.13 慢病毒感染
        2.2.14 细胞衰老检测：SA-β-gal 染色
        2.2.15 统计学分析
第3章 结果
    3.1 SAG、ROC1、NAE在人肾癌组织中过表达,与患者生存不良有关
    3.2 下调SAG、ROC1或NAE可抑制肾细胞癌细胞的生长。
    3.3 沉默SAG、ROC1、NAE诱发RCC细胞细胞凋亡,在 ROC1和SAG沉默的细胞中尤为明显
    3.4 沉默SAG、ROC1或NAE可引起RCC细胞G2 阻滞和细胞衰老
    3.5 BIM沉默部分缓解了因SAG、ROC1或NAE沉默对细胞增殖和存活的抑制作用
    3.6 BIM沉默部分挽救因沉默SAG、ROC1或NAE而诱发的细胞凋亡和衰老
第4章 讨论
    4.1 SAG(凋亡敏感基因，Sensitive to Apoptosis Gene)
    4.2 ROC1 /RBX1
    4.3 NAE
    4.4 BIM
    4.5 主要创新点
    4.6 不足之处
全文总结
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3744088