慢病毒介导核心结合因子α1基因感染对人牙龈成纤维细胞成骨特性的影响

发布时间：2023-02-18 12:33

　　目的研究慢病毒介导核心结合因子α1(cbfα1)基因感染对人牙龈成纤维细胞(hGFs)成骨特性的影响。方法构建携带目的基因的慢病毒表达载体pLenti6.3-cbfα1-Ires-EGFP (pL-cbfα1)(实验组),通过酶切、测序验证其构建成功,利用293T细胞包装病毒,并测定病毒浓度,将病毒液感染hGFs,pLenti6.3-Ires-EGFP (pL-E)为空载体组,未被感染的正常hGFs为空白对照组,通过荧光实时定量PCR检测cbfα1的mRNA的表达,通过细胞免疫化学染色检测cbfα1蛋白的表达;通过荧光实时定量PCR检测各组成骨相关基因骨涎蛋白(Bsp)、骨桥蛋白(Opn)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、骨钙蛋白(OC)的表达。结果慢病毒表达载体能够成功感染人牙龈成纤维细胞,并检测到cbfα1基因mRNA、蛋白的表达;实验组中,BSP、OPN、ColⅠ、OC的表达明显高于对照组和空载体组(P<0.05)。结论外源性基因cbfα1能够在人牙龈成纤维细胞中表达,并促进其向成骨细胞方向转化,为进一步研究该基因及种子细胞在牙周组织再生工程中的作用奠定了基础。

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试剂和仪器
    1.2 方法
        1.2.1 重组慢病毒构建及包装
        1.2.2 细胞培养
        1.2.3 慢病毒感染hGFs
        1.2.4 hGFs外源基因cbfα1 mRNA表达
        1.2.4 细胞免疫组化
        1.2.5 hGFs骨相关基因的表达
    1.3 统计学方法
2 结 果
    2.1 慢病毒构建及包装
    2.2 重组慢病毒感染hGFs
    2.3 外源基因cbfα1 mRNA表达
    2.4 细胞免疫染色
    2.5 成骨相关基因的表达
3 讨 论



本文编号：3744976