转录因子KLF7对IL-6基因的转录调控分析

发布时间：2023-03-05 14:36

　　选取小鼠IL-6基因转录起始位点上游2 000 bp序列作为启动子序列,采用在线生物信息学软件分析转录因子结合位点;利用PCR扩增小鼠IL-6基因启动子及其5’端截短突变体片段,构建相应的荧光素酶报告基因重组质粒,转染3T3-L1细胞后检测报告基因活性;采用共转染分析转录因子KLF7对IL-6基因启动子活性的影响;利用siRNA技术探究敲低KLF7对细胞内源性IL-6基因表达的影响。生物信息学分析显示,小鼠IL-6基因启动子区存在5个Sp1/KLFs结合位点;报告基因分析和定点突变分析发现,KLF7通过IL-6基因启动子区-98至-89 bp处(CCCCACCCAC)发挥调控IL-6基因启动子活性的作用;Real-time RT-PCR和Western blot分析显示,敲低KLF7抑制细胞内源性IL-6基因表达。文章首次发现KLF7直接调控IL-6基因表达,研究结果对揭示KLF7在脂肪生成中的作用机制具有重要意义。

【文章页数】：11 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料和试剂
    1.2 IL-6基因启动子区转录因子结合位点分析
    1.3 IL-6基因启动子及其5'端截短突变体报告基因载体构建
    1.4 IL-6基因启动子区KLF7结合位点定点突变
    1.5 细胞转染与双萤光素酶检测
        1.5.1 IL-6基因启动子截短突变体报告基因活性检测
        1.5.2 KLF7过表达对IL-6基因启动子报告基因载体活性分析
        1.5.3 定点突变对KLF7调控IL-6启动子活性的影响
    1.6 KLF7基因si RNA设计和干扰效率检测
    1.7 RNA提取、反转录和q RT-PCR
    1.8 Western blot分析
    1.9 数据分析
2 结果与分析
    2.1 IL-6基因启动子区转录因子结合位点分析
    2.2 小鼠IL-6基因启动子报告基因载体构建及活性分析
    2.3 小鼠IL-6基因启动子区转录因子KLF7结合位点鉴定
    2.4 沉默KLF7对IL-6表达的影响
3 讨论与结论



本文编号：3756375