基于Taqman探针的CKD相关基因检测荧光定量一步法试剂盒的构建及生物标志物验证的应用

发布时间：2023-03-29 01:57

　　研究背景:慢性肾脏疾病(CKD)是世界上影响人类健康的慢性病之一,目前对慢性肾脏病的诊断仍缺乏有效手段。近年来研究表明,尿液信使RNA(messenger RNA,mRNA)检测可能成为CKD早期无创诊断的有效手段。我们通过生物信息学和基因表达芯片的筛查,发现了一系列可能的CKD相关尿液mRNA诊断标志物。然而,既往基于SYBR两步PCR检测尿液mRNA的方法耗时耗力,限制了对候选标志物大样本的临床验证。本研究旨在构建一种基于Taqman探针荧光定量PCR一步试剂盒,提高尿液mRNA标志物的检测效率、敏感性、特异性,并通过临床样本验证和性能评价,构建CKD尿液mRNA一步法检测试剂盒,发现CKD新型诊断标志物。方法:应用生物信息学技术筛选CKD患者差异表达mRNA,从中选取三个mRNA基因,分别是PODXL、IL1RL1和CCL2。根据目的基因ID,在NCBI上下载PODXL、IL1RL1、CCL2、以及B2M(内参基因)基因全序列,并构建基于Taqman探针的CKD相关基因检测荧光定量一步法试剂盒,对试剂盒进行敏感性及重复性检验以检测试剂盒性能。筛选符合条件的受试者,收集受试者尿液样...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
英文缩略词表(符号、变量、缩略词等)
前言
综述
第一部分 基于生物信息学的慢性肾脏病差异表达mRNA筛选
    1.1 前言
    1.2 材料
    1.3 实验方法
    1.4 结果
    1.5 结论
第二部分 构建基于Taqman探针的CKD相关mRNA检测荧光定量一步法试剂盒
    2.1 前言
    2.2 材料
    2.3 原理
    2.4 探针及引物设计
    2.5 试剂盒组分配置
    2.6 尿液样本收集及处理
    2.7 实时定量PCR
    2.8 数据分析
    2.9 结果
    2.10 尿taqman探针一步法mRNA检测诊断标志物与传统sybrgreen法 mRNA检测技术优势比较
    2.11 结论
第三部分 CKD临床样本验证及诊断标志物效能分析
    3.1 前言
    3.2 筛选受试者并搜集临床资料信息
    3.3 收集尿液样本并理
    3.4 尿液候选mRNA标志物测
    3.5 数据处理和统计学分析
    3.6 入选受试者临床资料
    3.7 结果
    3.8 结论
讨论
结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3773752