基于CRISPR系统的双孢蘑菇基因编辑体系建立及应用

发布时间：2023-03-29 01:43

　　根据CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas(CRISPR-associated)基因编辑技术,设计AbPPO4特异性导向RNA,构建双孢蘑菇(Agaricus bisporus)基因编辑载体pAbGEB1-AbPPO4,再通过农杆菌介导转化双孢蘑菇菌丝体建立基因编辑体系,观察菌丝生长状况。结果表明:获得12株转化子,1号和7号的菌丝体中存在潮霉素抗性基因,且AbPPO4基因的相对表达量较低,分别为0.28±0.04和0.47±0.02,与对照组相比,组间差异均具有统计学意义(P<0.05),说明1号和7号转化子的菌丝体AbPPO4基因表达受到了抑制;与对照组相比,1号和7号转化子的菌丝体中AbPPO4基因均发生了突变,1号和7号分别产生了4 bp和11 bp的碱基缺失,证明设计的CRISPR/Cas9系统在双孢蘑菇内对AbPPO4基因成功地进行了编辑;同时发现AbPPO4基因突变后对双孢蘑菇菌丝体的生长产生了不利影响。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株
    1.2 主要试剂和仪器
    1.3 引物设计
    1.4 pAbGEB1载体构建
    1.5 pAbGEB1-AbPPO4载体构建
    1.6 双孢蘑菇菌丝体培养
    1.7 农杆菌介导的遗传转化
    1.8 AbPPO 4基因表达量测定
    1.9 菌丝体生长状况观察
    1.10 统计学处理
2 结果与分析
    2.1 基因编辑载体构建
    2.2 双孢蘑菇AbPPO 4基因突变转化子的获得
    2.3 AbPPO 4基因对双孢蘑菇菌丝体生长的影响
3 讨论



本文编号：3773730