外源褪黑素与褪黑素合成酶基因T5H-1在中华蜜蜂抗寒过程中的功能研究
发布时间：2023-04-07 01:36
中华蜜蜂是我国特有的授粉昆虫,对维持我国生态系统的平衡性方面具有重要作用。近年来,冷胁迫问题在我国频繁发生,对中华蜜蜂的生存造成极大影响。褪黑素是一种胺类激素,最新研究表明褪黑素能够帮助生物体提高耐寒性,但其能否提高中华蜜蜂的耐寒性,目前还未见报道。因此本研究以中华蜜蜂为实验材料,通过在饲粮中添加外源褪黑素的方法,探索最佳饲喂浓度,并检测低温胁迫下中华蜜蜂体内抗氧化酶的活性、氧化物质的含量和耐寒性物质的含量,从生理性角度加以揭示外源褪黑素对中华蜜蜂抗寒性的影响;通过分离获得褪黑素合成通路中的色氨酸羟化酶AccT5H-1基因,并研究其基因作用机理,从分子水平探讨内源褪黑素对中华蜜蜂抗寒性的影响,为进一步开发出提高中华蜜蜂抗寒能力的褪黑素饲料提供理论基础。主要研究结果如下:(1)在中华蜜蜂日常的饲粮中添加10μg/mL的褪黑素,蜜蜂在低温下的存活率最高。(2)低温胁迫下,饲粮中添加外源褪黑素后提高了中华蜜蜂体内的甘油和糖原的含量,增强了中华蜜蜂的耐寒性。(3)低温胁迫下,外源饲喂褪黑素可以提高中华蜜蜂体内的抗氧化酶的活性和Vc含量,降低了氧化物质(MDA和H2O
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 昆虫的耐寒性
1.1.1 昆虫的耐寒性定义
1.1.2 昆虫的耐寒策略
1.1.3 昆虫的过冷却现象及耐寒类型
1.2 影响昆虫耐寒性的因素
1.2.1 气温的季节变化
1.2.2 低温驯化
1.2.3 栖息地纬度和海拔的差异
1.2.4 其他生物因素
1.3 褪黑素的研究进展
1.3.1 褪黑素的发现与合成
1.3.2 褪黑素的功能
1.4 色氨酸羟化酶的研究进展
1.4.1 色氨酸羟化酶的结构与分类
1.4.2 色氨酸羟化酶的功能
1.5 本研究的目的和意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 蜜蜂材料
2.1.2 菌株与载体
2.1.3 酶与各种生化试剂
2.1.4 PCR引物
2.2 实验方法
2.2.1 中华蜜蜂的饲养与处理
2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备
2.2.3 AccT5H-1基因编码区的获取
2.2.4 目的DNA片段的回收
2.2.5 目的DNA片段的连接与转化
2.2.6 大肠杆菌质粒DNA的提取
2.2.7 中华蜜蜂总RNA的提取
2.2.8 反转录cDNA的合成
2.2.9 实时荧光定量PCR分析基因的表达水平
2.2.10 双链RNA的合成
2.2.11 RNA干扰AccT5H-1
2.2.12 Acc T5H-1基因沉默后部分抗氧化基因的转录水平的测定
2.2.13 Acc T5H-1基因沉默后抗氧化酶的活性的测定
2.2.14 AccT5H-1 基因沉默后氧化物质和Vc含量测定
2.2.15 饲喂褪黑素后蜜蜂体内抗氧化酶的活性测定
2.2.16 饲喂褪黑素后蜜蜂体内氧化物质和Vc含量测定
2.2.17 饲喂褪黑素后蜜蜂体内甘油和糖原的含量测定
3 结果与分析
3.1 外源褪黑素浓度的筛选及相关研究
3.1.1 外源褪黑素浓度的筛选
3.1.2 低温胁迫下外源褪黑素对中华蜜蜂抗氧化酶活性的影响
3.1.3 低温胁迫下外源褪黑素对中华蜜蜂氧化物质和Vc含量的影响
3.1.4 低温胁迫下外源褪黑素对中华蜜蜂耐寒物质含量的影响
3.1.5 低温胁迫下外源褪黑素对中华蜜蜂褪黑素合成关键酶AccT5H-1基因表达量的影响
3.2 AccT5H-1基因的克隆及生物信息学分析
3.2.1 AccT5H-1基因的克隆
3.2.2 中华蜜蜂AccT5H-1蛋白结构分析
3.2.3 中华蜜蜂AccT5H-1启动子序列的顺势作用元件预测
3.2.4 中华蜜蜂AccT5H-1基因组结构分析
3.3 中华蜜蜂AccT5H-1在低温胁迫条件下的表达特性
3.4 RNAi介导的中华蜜蜂AccT5H-1 基因沉默
3.4.1 中华蜜蜂AccT5H-1基因沉默鉴定
3.4.2 中华蜜蜂AccT5H-1基因沉默后抗氧化基因的表达分析
3.4.3 中华蜜蜂AccT5H-1基因沉默后对抗氧化酶活性的影响
3.4.4 中华蜜蜂AccT5H-1 基因沉默后对中华蜜蜂体内氧化物质和Vc含量的影响
4 讨论
4.1 外源褪黑素对中华蜜蜂耐寒性的影响
4.1.1 外源褪黑素浓度的确定
4.1.2 外源褪黑素对中华蜜蜂体内耐寒指标的影响
4.1.3 外源褪黑素对中华蜜蜂体内抗氧化酶的影响
4.1.4 外源褪黑素对中华蜜蜂体内氧化物质和Vc含量的影响
4.2 AccT5H-1基因与褪黑素在低温下的影响
4.2.1 AccT5H-1基因蛋白结构分析
4.2.2 RNAi介导的AccT5H-1 基因沉默
4.2.3 AccT5H-1基因表达特性分析
5 结论
参考文献
致谢
本文编号：3784825
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 昆虫的耐寒性
1.1.1 昆虫的耐寒性定义
1.1.2 昆虫的耐寒策略
1.1.3 昆虫的过冷却现象及耐寒类型
1.2 影响昆虫耐寒性的因素
1.2.1 气温的季节变化
1.2.2 低温驯化
1.2.3 栖息地纬度和海拔的差异
1.2.4 其他生物因素
1.3 褪黑素的研究进展
1.3.1 褪黑素的发现与合成
1.3.2 褪黑素的功能
1.4 色氨酸羟化酶的研究进展
1.4.1 色氨酸羟化酶的结构与分类
1.4.2 色氨酸羟化酶的功能
1.5 本研究的目的和意义
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 蜜蜂材料
2.1.2 菌株与载体
2.1.3 酶与各种生化试剂
2.1.4 PCR引物
2.2 实验方法
2.2.1 中华蜜蜂的饲养与处理
2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备
2.2.3 AccT5H-1基因编码区的获取
2.2.4 目的DNA片段的回收
2.2.5 目的DNA片段的连接与转化
2.2.6 大肠杆菌质粒DNA的提取
2.2.7 中华蜜蜂总RNA的提取
2.2.8 反转录cDNA的合成
2.2.9 实时荧光定量PCR分析基因的表达水平
2.2.10 双链RNA的合成
2.2.11 RNA干扰AccT5H-1
2.2.12 Acc T5H-1基因沉默后部分抗氧化基因的转录水平的测定
2.2.13 Acc T5H-1基因沉默后抗氧化酶的活性的测定
2.2.14 AccT5H-1 基因沉默后氧化物质和Vc含量测定
2.2.15 饲喂褪黑素后蜜蜂体内抗氧化酶的活性测定
2.2.16 饲喂褪黑素后蜜蜂体内氧化物质和Vc含量测定
2.2.17 饲喂褪黑素后蜜蜂体内甘油和糖原的含量测定
3 结果与分析
3.1 外源褪黑素浓度的筛选及相关研究
3.1.1 外源褪黑素浓度的筛选
3.1.2 低温胁迫下外源褪黑素对中华蜜蜂抗氧化酶活性的影响
3.1.3 低温胁迫下外源褪黑素对中华蜜蜂氧化物质和Vc含量的影响
3.1.4 低温胁迫下外源褪黑素对中华蜜蜂耐寒物质含量的影响
3.1.5 低温胁迫下外源褪黑素对中华蜜蜂褪黑素合成关键酶AccT5H-1基因表达量的影响
3.2 AccT5H-1基因的克隆及生物信息学分析
3.2.1 AccT5H-1基因的克隆
3.2.2 中华蜜蜂AccT5H-1蛋白结构分析
3.2.3 中华蜜蜂AccT5H-1启动子序列的顺势作用元件预测
3.2.4 中华蜜蜂AccT5H-1基因组结构分析
3.3 中华蜜蜂AccT5H-1在低温胁迫条件下的表达特性
3.4 RNAi介导的中华蜜蜂AccT5H-1 基因沉默
3.4.1 中华蜜蜂AccT5H-1基因沉默鉴定
3.4.2 中华蜜蜂AccT5H-1基因沉默后抗氧化基因的表达分析
3.4.3 中华蜜蜂AccT5H-1基因沉默后对抗氧化酶活性的影响
3.4.4 中华蜜蜂AccT5H-1 基因沉默后对中华蜜蜂体内氧化物质和Vc含量的影响
4 讨论
4.1 外源褪黑素对中华蜜蜂耐寒性的影响
4.1.1 外源褪黑素浓度的确定
4.1.2 外源褪黑素对中华蜜蜂体内耐寒指标的影响
4.1.3 外源褪黑素对中华蜜蜂体内抗氧化酶的影响
4.1.4 外源褪黑素对中华蜜蜂体内氧化物质和Vc含量的影响
4.2 AccT5H-1基因与褪黑素在低温下的影响
4.2.1 AccT5H-1基因蛋白结构分析
4.2.2 RNAi介导的AccT5H-1 基因沉默
4.2.3 AccT5H-1基因表达特性分析
5 结论
参考文献
致谢
本文编号：3784825
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3784825.html
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