结合基因测序与质谱鉴定MHC-Ⅰ递呈的新生抗原肽的策略研究

发布时间：2023-04-09 16:31

　　肿瘤是基因的体细胞突变的累积导致的。新生抗原肽是由这些突变造成的氨基酸序列变化的蛋白质在一系列生化反应后被MHC-Ⅰ分子递呈的一段含有突变氨基酸的多肽。新生抗原肽只表达于肿瘤细胞表面,并且不受免疫耐受的影响,这使其成为免疫治疗的理想靶点。本文结合质谱和新一代高通量测序技术,利用免疫沉淀和蛋白提取两种策略尝试从人肿瘤细胞系和实体瘤组织中发现新生抗原肽。免疫沉淀非小细胞肺癌细胞系NCI-H460总共鉴定到758条不同的递呈肽,并鉴定到一条癌胚抗原肽EVSEPSMLQK。我们合成了包括癌胚抗原肽的4条多肽进行验证,进一步增加了鉴定到的多肽的可信度。但是,通过免疫沉淀的方式,我们未能从细胞系或是人肿瘤组织中鉴定到新生抗原肽。蛋白提取的结果显示甲醇/氯仿提取后Trypsin酶解适用于发现肿瘤组织或肿瘤细胞系中由点突变形成的新生抗原。TritonX-114的提取方式可以对甲醇/氯仿的结果进行扩充。在不同肿瘤组织的实验证实了这两种提取方法的可行性。我们合成验证了其中一条突变多肽,并结合预测得到一条新生抗原肽KAYHEQLSV。因此,质谱鉴定得到的新生抗原,可优先进行新生抗原肽的预测和免疫原性的检测。...

【文章页数】：117 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
缩略词
1 绪论
    1.1 癌症治疗
    1.2 主要组织相容性复合体蛋白
    1.3 新生抗原及递呈原理
    1.4 质谱在检测新生抗原肽的应用
    1.5 本研究的目的和内容
    1.6 技术路线
2 肿瘤细胞系和组织的MHC-Ⅰ递呈肽的探究
    2.1 前言
    2.2 实验仪器与材料
    2.3 实验步骤与方法
    2.4 实验结果
    2.5 实验讨论
    2.6 小结
3 肿瘤细胞系和组织的新生抗原的鉴定
    3.1 前言
    3.2 实验仪器与材料
    3.3 实验步骤与方法
    3.4 实验结果
    3.5 小结
结论与展望
参考文献
附录
综述
    参考文献
作者简介



本文编号：3787366