两种来源间充质干细胞的分离及cxcr2基因修饰治疗LPS所致小鼠脓毒症的实验研究

发布时间：2023-05-03 14:15

　　脓毒症(sepsis)是针对感染的宿主免疫反应失调导致危及生命的器官功能障碍,是目前世界范围内感染致死最主要的原因。全世界范围内每年超过3000万人罹患脓毒症,其中多达四分之一甚至更多的人死亡。脓毒症的治疗给全球医疗卫生事业带来了巨大的负担,尤其是低收入和中收入国家。目前脓毒症治疗主要是使用抗生素和支持疗法,但这些疗法在脓毒症引起全身炎症和器官功能障碍中的治疗效果有限。因此,迫切需要临床和科研工作者探索和发展更为有效的治疗手段。在过去的十几年中,细胞疗法已成为脓毒症治疗新希望之一。间充质干细胞(MSC)是广泛存在于外周血、骨髓、脂肪、脐带、脐带血、胎盘等几乎所有组织基质的成体干细胞,具有快速增殖、高分化潜能和自我更新复制的能力,可诱导分化为人体多种细胞,包括成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等。MSC最显著的特性在于其具有较强的免疫调节作用,且来源丰富、易于分离和体外扩增,使其成为细胞治疗的理想种子细胞。近年来,多项试验研究表明MSC能够调节脓毒症的病理生理过程,而基于MSC的细胞疗法是脓毒症治疗的新手段。其主要机制在于MSC作为免疫反应的强效调节剂,可以使固有和适应性免疫应答恢复...

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

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缩略语表
中文摘要
Abstract
前言
文献回顾
第一部分 小鼠骨髓来源的间充质干细胞分离及 cxcr2 基因修饰在LPS 所致脓毒症动物模型中的作用研究
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 细胞与质粒
        1.3 实验试剂
        1.4 实验耗材
        1.5 实验仪器
    2 方法
        2.1 小鼠骨髓间充质干细胞分离培养鉴定
        2.2 pLenti-cxcr2-GZ慢病毒载体构建
        2.3 CXCR2 慢病毒包装
        2.4 pLenti-cxcr2-GZ稳定转染的小鼠骨髓间充质干细胞构建、筛选及鉴定
        2.5 Transwell实验检测CXCR2-BMSC迁移能力
        2.6 Real-time PCR检测LPS所致的脓毒症模型中CXC型趋化因子的表达
        2.7 LPS所致的脓毒症模型的建立及CXCR2-BMSC移植
        2.8 组织学检测
        2.9 Elisa检测血清炎性因子
        2.10 肺干湿比变化
        2.11 小动物活体成像检测CXCR2-BMSC体内迁移能力
        2.12 统计学方法
    3 结果
        3.1 分离小鼠骨髓间充质干细胞的鉴定结果
        3.2 pLenti-cxcr2-GZ慢病毒载体构建结果
        3.3 CXCR2 慢病毒包装及表达鉴定结果
        3.4 CXCR2-GZ稳定转染的小鼠骨髓间充质干细胞构建、筛选及鉴定结果
        3.5 Transwell实验检测CXCR2-BMSC迁移能力的结果
        3.6 LPS所致的脓毒症模型中CXC型趋化因子mRNA表达水平检测结果
        3.7 CXCR2-BMSC移植改善脓毒症后肺组织损伤的效果评价
        3.8 CXCR2-BMSC移植对脓毒症小鼠炎性因子水平的影响结果
        3.9 CXCR2-BMSC移植对肺干湿比变化的检测结果
        3.10 CXCR2-BMSC体内迁移能力的检测结果
    4 讨论
第二部分 人脐带来源的间充质干细胞分离及 cxcr2 基因修饰在LPS 所致脓毒症动物模型中的作用研究
    1 材料
        1.1 实验动物
        1.2 细胞与质粒
        1.3 实验试剂
        1.4 实验仪器
        1.5 实验耗材
    2 方法
        2.1 人脐带间充质干细胞分离培养鉴定
        2.2 pLenti-cxcr2-GZ转染的人脐带间充质干细胞构建及鉴定
        2.3 Transwell实验检测CXCR2-hUCMSC迁移能力
        2.4 LPS所致的脓毒症模型的建立及CXCR2-hUCMSC移植
        2.5 组织学检测
        2.6 Elisa检测血清炎性因子
        2.7 肺干湿比变化
        2.8 小动物活体成像检测CXCR2-hUCMSC体内迁移能力
        2.9 统计学方法
    3 结果
        3.1 分离人脐带间充质干细胞及鉴定结果
        3.2 pLenti-cxcr2-GZ转染的人脐带间充质干细胞构建及鉴定结果
        3.3 Transwell实验检测CXCR2-hUCMSC迁移能力的结果
        3.4 CXCR2-hUCMSC移植后脓毒症小鼠HE染色结果
        3.5 Elisa检测CXCR2-hUCMSC移植后小鼠血清炎性因子结果
        3.6 CXCR2-hUCMSC移植后脓毒症小鼠肺干湿比变化结果
        3.7 小动物活体成像检测CXCR2-hUCMSC体内迁移能力变化结果
    4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢



本文编号：3806861