抑制或沉默Akt基因表达可逆转人结肠癌耐药SW1116/HCPT细胞的耐药性

发布时间：2023-05-03 13:18

　　目的 :研究阻断磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(seride-threonine protein kinase,又称Akt)信号通路对逆转耐羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)人结肠癌SW1116/HCPT细胞多药耐药性的影响。方法:采用蛋白质印迹法检测亲本SW1116细胞和耐HCPT细胞株SW1116/HCPT中Akt及磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)蛋白的表达水平。应用针对PI3K/Akt信号通路的小分子抑制剂LY294002或siR NA干扰的方法分别抑制或沉默Akt蛋白的表达;MTT法检测抑制或沉默Akt蛋白表达后,HCPT对SW1116/HCPT细胞生存率的影响;实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测对耐药转运体三磷酸腺苷结合盒转运体G(2ATP-binding cassette transporter G2,ABCG2)mR NA及蛋白表达的影响;罗丹明123(rhodamine123,Rh123)法检测对SW1116/HCPT细胞药物外排功能的影响。结...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞与试剂
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 蛋白质印迹法检测亲本SW1116和耐药SW1116/HCPT细胞中Akt及p-Akt的表达水平
        1.2.3 瞬时转染si RNA及有效si RNA的筛选
        1.2.4 抑制或沉默Akt基因表达对耐药SW1116/HCPT细胞中PI3K/Akt信号通路活性的影响
        1.2.5 采用MTT法检测细胞的存活率
        1.2.6 抑制或沉默Akt基因表达对耐药相关基因ABCG2 m RNA表达的影响
        1.2.7 抑制或沉默Akt基因表达对耐药相关基因ABCG2蛋白表达水平的影响
        1.2.8 Rh123药物外排实验
        1.2.9 统计学方法
2 结果
    2.1 亲本细胞SW1116和耐药细胞SW1116/HCPT中Akt的表达和活化
    2.2 有效si RNA的筛选
    2.3 LY294002抑制及Akt-si RNA沉默Akt基因表达对耐药SW1116/HCPT细胞中PI3K/Akt信号通路活性的影响
    2.4 LY294002抑制及Akt-si RNA沉默Akt基因表达后SW1116/HCPT细胞对HCPT药物敏感性的改变
    2.5 LY294002抑制及Akt-si RNA沉默Akt基因表达对SW1116/HCPT细胞中ABCG2表达的影响
    2.6 LY294002抑制及Akt-si RNA沉默Akt基因表达对耐药细胞ABCG2转运功能的影响
3 讨论



本文编号：3806773