利用CRISPR/Cas9方法敲除CBFβ基因及CBFβ真核表达载体的构建

发布时间：2023-05-17 23:36

　　构建CBFβ敲除Hep G2细胞系及CBFβ真核表达载体。CRISPR/Cas9基因敲除,将表达CBFβsgRNA,Cas9的表达载体共转Hep G2细胞,嘌呤霉素筛选基因敲除细胞,构建细胞系。infusion cloning方法构建CBFβ表达载体,Hep G2细胞提取RNA,反转成c DNA,设计CBFβ引物扩增目的基因,连接,转化,挑取阳性克隆,PCR鉴定,酶切鉴定,测序进一步鉴定。获得了稳定敲除CBFβ的Hep G2细胞系及在Hep G2细胞中稳定表达的CBFβ真核表达载体。为研究CBFβ基因在对乙型肝炎病毒复制的调控及调控机制奠定了基础。

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞株、质粒
        1.1.2 试剂与引物
        1.1.3 仪器
    1.2 方法
        1.2.1 sgRNA的设计和寡核苷酸链合成
        1.2.2 构建sgRNA表达载体
        1.2.3 细胞培养和细胞转染
        1.2.4 筛选稳定敲除CBFβ的Hep G2细胞株
        1.2.5 CBFβ基因的克隆
        1.2.6 RT-PCR鉴定
        1.2.7 Western blot鉴定
2 结果
    2.1 构建CBFβ-sgRNA表达载体
    2.2 转染Hep G2细胞,构建稳定敲除CBFβ细胞系
    2.3 构建真核表达载体VR1012-HA-CBFβ
3 讨论



本文编号：3818230