双氢睾酮浓度波动对前列腺上皮细胞增殖和错配修复基因MLH1的影响及其机制

发布时间：2023-05-21 20:30

　　研究背景:雄激素与前列腺癌的发生密切相关,但其中机制尚不明确。成年男性随着年龄的增长,其血清睾酮浓度的波动趋势也逐日增加。雄激素的不稳定可能会导致相关细胞生长信号通路的失调,进而影响DNA的复制过程。在外界因素和自身因素的作用下,DNA复制过程中碱基会有一定概率发生错误配对,错配修复(Mismatch repair,MMR)系统能够通过迅速地识别错误、限定切除和填补空缺,以保证遗传信息的高保真度。前列腺癌的发生与MMR系统核心基因MLH1的表达和功能异常相关。因此,雄激素的变化可能对DNA损伤修复发挥重要影响,其中潜在机制尚不明确。目的:探讨双氢睾酮(Dihydrotestosterone,DHT)以及其浓度波动对前列腺上皮细胞(RWPE-2细胞系)增殖能力以及细胞中错配修复相关蛋白MutL同源物(MLH1)表达的影响并初步阐释产生其细胞生物学行为改变的潜在机制。方法:1.应用梯度浓度的DHT(DHT浓度为0、1、10、50、100 nmol/L)处理RWPE-2细胞不同的时间(0、24、48、72h)后观察比对细胞状态的改变;应用Western blot技术方法、实时荧光定量PCR技...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
主要缩略语注释表
第一章 绪论
    1.1 研究背景
    1.2 研究目的、内容和技术路线
        1.2.1 目的
        1.2.2 内容
        1.2.3 技术路线
第二章 双氢睾酮浓度波动对前列腺上皮细胞生物学行为的影响
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器及耗材
        2.1.3 主要试剂配制
    2.2 主要实验方法及步骤
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 实验分组行形态学观察
            2.2.2.1 筛选适宜DHT处理浓度
            2.2.2.2 设立实验分组,加入处理因素
        2.2.3 细胞增殖检测-CCK-8 法
        2.2.4 WESTERN BLOT
        2.2.5 RT-qPCR
        2.2.6 统计学分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 梯度浓度DHT对 RWPE-2 细胞形态学的影响
        2.3.2 梯度浓度DHT对 RWPE-2 细胞中MLH1 表达的影响
        2.3.3 波动浓度DHT对 RWPE-2 细胞形态学的影响
        2.3.4 波动浓度DHT对 RWPE-2 细胞增殖能力的影响
        2.3.5 波动浓度DHT对 RWPE-2 细胞中MLH1 表达的影响
    2.4 讨论
第三章 双氢睾酮波动促进RWPE-2 细胞增殖和MLH1 表达的机制研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 主要材料
        3.1.2 常用试剂的配制
    3.2 主要实验方法及步骤
        3.2.1 公共数据分析
        3.2.2 部分引物的设计
        3.2.3 免疫荧光
        3.2.4 统计学分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 CHIPBase V2.0公共数据库分析AR基因与MLH1基因在前列腺癌中表达的相关性
        3.3.2 DHT波动干预RWPE-2 细胞后AR通路的变化
        3.3.3 DHT波动干预RWPE-2 细胞后AKT通路的变化
            3.3.3.1 梯度浓度DHT处理RWPE-2 细胞后AKT通路的变化
            3.3.3.2 波动浓度DHT处理RWPE-2 细胞后AKT通路的变化
    3.4 讨论
        3.4.1 DHT波动激活AR通路,促进细胞增殖
        3.4.2 DHT波动激活AKT通路,促进细胞增殖,抑制凋亡
        3.4.3 AR和AKT信号通路协同促进细胞增殖和MLH1 的表达
第四章 结论与展望
参考文献
综述
    参考文献
致谢
硕士期间发表论文



本文编号：3821402