细粒棘球绦虫PGK、E2D2基因的特征分析及EgFABP-EgA31、EgTPx-EgTrp蛋白免疫保护效果评价

发布时间：2024-02-14 21:06

　　细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)的幼虫(细粒棘球蚴)寄生于人和多种动物的内脏器官所致的一种严重的人畜共患寄生虫病被称为细粒棘球蚴病。该病呈世界性分布,我国是高发地区之一,分布在国内23个省、市、自治区,遍布全国368个县,其中以四川西北部、新疆、青海、西藏牧区发病率最高,给我国畜牧业带来了巨大的经济损失,也给人类带来了许多环境卫生和健康安全问题。本研究扩增出细粒棘球绦虫磷酸甘油酸激酶(Eg-PGK)和泛素结合酶D2(Eg-E2D2)基因,分析其基本特征,为细粒棘球绦虫相关蛋白的研究提供重要的参考数据和资料。同时,还克隆、融合表达出细粒棘球绦虫脂肪酸结合蛋白和A31蛋白(EgFABP-EgA31)以及细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶和原肌球蛋白(EgTPx-EgTrp),免疫犬后评价其免疫保护效果。一、细粒棘球绦虫磷酸甘油酸激酶基因的克隆、表达及特征分析本研究对Eg-PGK进行了克隆和原核表达,结果显示Eg-PGK大小为1248 bp,编码了415个氨基酸。免疫印迹实验显示rEg-PGK具有反应原性。用间接免疫荧光定位方法对Eg-PGK进行定位分析,发现Eg...

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【部分图文】：

图1Eg-PGKPCR扩增M：DNA分子质量标准MakerⅢ；1：PCR产物Figure1PCRamplificationofEg-PGK

19图1Eg-PGKPCR扩增M：DNA分子质量标准MakerⅢ；1：PCR产物Figure1PCRamplificationofEg-PGKM:DNAmakerMakerⅢ;Lane1:Eg-PGK3.1.2Eg-PGK基因的生物信息学分析扩增出的细粒棘球绦虫Eg-PGK基因长....

图2Eg-PGK氨基酸序列比对分析

21图2Eg-PGK氨基酸序列比对分析序列号：EchinococcusgranulosusPGK(GenBank:XP_024350594.1)；EchinococcusmultilocularisPGK(GenBank:CDS42716.1);Hymenolepismicros....

图3Eg-PGK基因系统进化树（ML树）

22红色三角形：催化位点。Figure2SequencealinmentofEg-PGKResiduesinvolvedinthesubstratebindingsiteareindicatedwithwhitetriangles,thoseinvolvedinhingeregi....

图4不同IPTG浓度对重组蛋白Eg-PGK表达的影响

233.2rEg-PGK的表达与反应原性分析3.2.1IPTG浓度的优化将pET32a-Eg-PGK重组菌在IPTG浓度分别为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mmol/L的条件下进行诱导表达，结果显示1.2mmol/L的浓度为其最佳浓度（图4）。图4不同IPTG浓度....

本文编号：3898617