KK-42对日本沼虾3个几丁质结合蛋白基因表达的影响

发布时间：2024-02-17 21:50

　　日本沼虾几丁质结合蛋白(Macrobrachium nipponense Chitin Binding Proteins,MnCBPs)是构成表皮的主要结构性蛋白,其基因的表达与蜕皮周期关系紧密,由于CBPs间的相似性较低,且表皮不同的部位MnCBPs表达的时序性差异较大,提示:CBPs在蜕皮周期中的作用不尽相同。实验室前期研究发现,咪唑类物质KK-42处理日本沼虾幼虾,能显著缩短其蜕皮周期的时程。为了初步探究KK-42作用的分子机理,本文依据日本沼虾表皮组织转录组测序结果,筛选出3条新的含有几丁质结合-4(chitin_bind₄)结构域的MnCBPs,利用PCR技术,从头胸甲表皮组织中克隆到cDNA序列片段,测序长度分别为362、431和1327 bp,按实验室发现的先后顺序命名为MnCBP-6(GenBank:KY126106)、MnCBP-7(GenBank:KY270879)和MnCBP-8(GenBank:MG818722)。生物信息学分析表明,3个MnCBPs均包含RR基序,与其他物种的多序列比对发现,MnCBP-6、MnCBP-...

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图1-1甲壳动物表皮结构在蜕皮周期中的变化（引自Dillaman[19]

图1-1甲壳动物表皮结构在蜕皮周期中的变化（引自Dillaman[19]等）A：蜕皮间期；B：蜕皮前早期，上皮细胞层与旧表皮脱离；C：蜕皮前晚期，新的上表皮层和外表皮层已经在旧表皮下开始形成；D：蜕皮；E：蜕皮后，内表皮层开始形成，直到蜕皮间期（A）表皮完全形成。Fig.....

图3-1日本沼虾总RNA电泳图

第三章结果第三章结果虾表皮组织总RNA的提取及cDNA第一链的获isoPlus（TaKaRa）试剂盒从KK-42处理后0、3、6、12、24别提取处于C、D0-2、D3-4和A期的头胸甲、尾扇、游泳足检测其A260/A280比值在1.8~2.....

图3-2MnCBP-6cDNA部分序列及预测的氨基酸序列

以头胸甲cDNA为模板，经PCR扩增，得到三条CBPs基因片段，NCBI保守域检索显示，三条基因的氨基酸序列中都含有保守的几丁质结合-4结合域（chitin_bind_4）和RR基序（图3-2，图3-4，图3-6），可以确定属于CBPs基因。依据本实....

图3-3MnCBP-6与其它物种表皮蛋白氨基酸序列比对黑色代表相同水平为100%，灰色代表相同水平≥50%，下同

图3-3MnCBP-6与其它物种表皮蛋白氨基酸序列比对黑色代表相同水平为100%，灰色代表相同水平≥50%，下同。Fig.3-3ThealignmentofMnCBP-6withotherspeciesBlackindicatesthehomolo....

本文编号：3901378