辣椒脉斑驳病毒的多基因联合检测与鉴定

发布时间：2024-03-22 00:44

　　【目的】辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)是辣椒生产上危害严重的病毒,也是口岸检疫的重要病毒之一。本文旨在建立一种快速检测ChiVMV的多基因联合检测方法,实现ChiVMV的快速、准确鉴定。【方法】利用DAS-ELISA、RT-PCR方法对印度进境辣椒进行检测以确定是否携带有ChiVMV。根据ChiVMV外壳蛋白(coat protein,CP)和圆柱状内含体蛋白(cytoplasmic inclusion protein,CI)保守区域分别设计引物,筛选两个基因(CP和CI)的特异性引物组合,通过设定不同的引物用量组合以及对退火温度等条件进行优化,探索最佳的反应条件,建立多基因联合检测方法。利用建立的多基因联合检测体系对包含ChiVMV在内的辣椒病毒进行检测,以验证该体系特异性。同时对ChiVMV阳性样品的不同浓度cDNA进行扩增,测定其检测灵敏度。此外,对田间辣椒样本进行检测,以验证体系的实际应用效果。【结果】通过对印度进境辣椒的DAS-ELISA检测,发现样品提取液与ChiVMV呈阳性反应;利用CP861-F/CP861-R特异性...

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【部分图文】：

图1印度进境辣椒常规RT-PCR扩增

利用CP337-F/CP337-R、CI655-F/CI655-R两对引物分别进行RT-PCR扩增及多基因联合检测，结果显示多基因联合检测体系扩增出与预期大小一致的CP及CI两个片段，大小分别约为337和655bp，与两个基因单独扩增效果一致，且无非特异性扩增（图2）。不同退火....

图2多基因联合检测RT-PCR结果

图1印度进境辣椒常规RT-PCR扩增图3多基因联合检测体系退火温度的优化

图3多基因联合检测体系退火温度的优化

图2多基因联合检测RT-PCR结果2.3多基因联合检测的特异性

图4多基因联合检测体系引物用量的优化

经优化之后的多基因联合检测体系能够从ChiVMV上同时扩增出CP及CI的目的片段，且未出现非特异性扩增，而其他辣椒主要病毒均未扩增出相应的条带（图5）；同时，两个基因片段的PCR产物经回收纯化后进行克隆测序，所测的序列与已报道的ChiVMV序列一致性均高达98%以上，表明所扩增出....

本文编号：3934377