猪CAⅢ基因CDS克

发布时间：2024-04-09 21:55

　　碳酸酐酶家族(Carbonic anhydrases,CAs),两步反应催化CO₂的可逆水合反应(CO₂+H₂O?H₂CO₃?HCO^3-+H⁺)以形成碳酸氢盐和质子以维持胞内、胞外酸碱平衡。碳酸酐酶Ⅲ(Carbonic anhydraseⅢ,CAⅢ)属于CA家族,但是在组织分布、催化CO₂活性上都与其它同工酶不同。主要是因为CAⅢ蛋白64位氨基酸的改变(His→Lys)及两个半胱氨酸和两个反应性的巯基。目前,CAⅢ基因主要在人、鼠肌肉和脂肪表型进行研究,而猪上对细胞增殖的表型研究相对较少。因此本试验通过RT-PCR和克隆测序获得猪CAⅢ基因的CDS序列;通过生物信息学技术预测该基因编码的蛋白质的结构、功能、定位等;利用qRT-PCR技术检测CAⅢ基因的时空表达特征;利用同源重组方法和CRISPR/Cas9技术构建pcDNA 3.1-EGFP-CAⅢ过表达载体及敲除载体,并转染至PK15细胞中,qRT-PCR检测细...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1α、β、γ、ζ-CA家族的结构

3图1-1α、β、γ、ζ-CA家族的结构Fig.1-1Structureoftheα,β,γ,ζofCAfamily1.2碳酸酐酶作用机制CA具有高催化效率，其中CAII转化效率为1.1μs-1[14]。CAII和所有α-CA质子转移均是两步（图1-3[1]），第一步CO2的亲核....

图1-2α-CA反应方程式

3图1-1α、β、γ、ζ-CA家族的结构Fig.1-1Structureoftheα,β,γ,ζofCAfamily1.2碳酸酐酶作用机制CA具有高催化效率，其中CAII转化效率为1.1μs-1[14]。CAII和所有α-CA质子转移均是两步（图1-3[1]），第一步CO2的亲核....

图1-3活跃位点机制

4图1-3活跃位点机制Fig.1-3Activesitemechanism1.3碳酸酐酶作用碳酸酐酶是许多生理过程的主要参与者[17]，如糖异生、信号传导[18]、CO2/HCO3-的转换[5]，也与肿瘤形成、肥胖和癌症等多种疾病有关，被认为是药物靶标[1]。肿瘤代谢源源不断的产....

图1-4CRISPR／Cas9作用机制Fig.1-4CRISPR/Cas9mechanism

6综上所述，CAⅢ独特的空间结构使得质子转移能力较弱，两个反应性半胱氨酸及两个反应性巯基赋予CAⅢ抗氧化功能。3CRISPR／Cas9系统研究进展3.1CRISPR／Cas9概述CRISPR是由一系列短的高度保守的重复序列[41]以及长度相似的间隔序列间隔组成[42]。从发现至今....

本文编号：3949695