家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂Bmserpin2对酚氧化酶原激活和抗菌肽基因表达的抑制作用

发布时间：2024-04-17 22:57

　　【目的】丝氨酸蛋白酶抑制剂家族蛋白是昆虫中调控自身免疫反应的重要蛋白酶抑制剂,本研究旨在研究家蚕Bombyx mori丝氨酸蛋白酶抑制剂2(Bmserpin2)在家蚕2个重要的自身免疫通路即酚氧化酶原(prophenol oxidase, PPO)激活通路和革兰氏阳性菌诱导抗菌肽的TOLL通路中的调控作用。【方法】PCR扩增家蚕Bmserpin2基因片段后原核表达并通过镍柱纯化。利用纯化后的重组Bmserpin2蛋白分别与胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶和蛋白酶K反应,检测Bmserpin2对上述蛋白酶活性的影响。通过RT-qPCR检测Bmserpin2在家蚕5龄第3天幼虫头、中肠、脂肪体、血淋巴、丝腺和表皮组织中表达的模式。往家蚕5龄第3天幼虫注射Bmserpin2重组蛋白,检测Bmserpin2对其血淋巴中PPO活性的影响。通过滕黄微球菌Micrococcus luteus诱导家蚕5龄第3天幼虫产生抗菌肽并注射Bmserpin2重组蛋白后,RT-qPCR检测其血淋巴中抗菌肽基因gloverin2和moricin表达量。【结果】成功构建重组质粒并表达纯化目的蛋白Bmserpin2。...

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【部分图文】：

图1原核表达与纯化重组蛋白Bmserpin2的SDS-PAGE检测(A)及Westernblot分析(B)

结果如图5所示,注射滕黄微球菌和PBS的阳性对照组较空白对照组抗菌肽基因gloverin2和moricin表达上调,而注射滕黄微球菌和Bmserpin2混合物的实验组中gloverin2(图5:A)和moricin(图5:B)的mRNA水平显著性下调(P<0.05)。这一结果....

图2家蚕重组蛋白Bmserpin2对胰蛋白酶(A)、胰凝乳蛋白酶(B)、弹性蛋白酶(C)和蛋白酶K(D)活性的影响

图1原核表达与纯化重组蛋白Bmserpin2的SDS-PAGE检测(A)及Westernblot分析(B)图3RT-qPCR检测Bmserpin2在家蚕5龄幼虫不同组织中的相对表达量

图3RT-qPCR检测Bmserpin2在家蚕5龄幼虫不同组织中的相对表达量

图2家蚕重组蛋白Bmserpin2对胰蛋白酶(A)、胰凝乳蛋白酶(B)、弹性蛋白酶(C)和蛋白酶K(D)活性的影响图4重组蛋白Bmserpin2对家蚕5龄幼虫血淋巴中酚氧化酶原活性的影响

图4重组蛋白Bmserpin2对家蚕5龄幼虫血淋巴中酚氧化酶原活性的影响

图3RT-qPCR检测Bmserpin2在家蚕5龄幼虫不同组织中的相对表达量图5RT-qPCR检测Bmserpin2蛋白对家蚕5龄幼虫血淋巴中抗菌肽基因gloverin2(A)和moricin(B)表达的影响

本文编号：3957051