蜕皮激素对豌豆蚜翅型发育相关miRNA及其靶标基因的调控机制初探

发布时间：2024-04-18 20:02

　　蚜虫隶属于昆虫纲(Insecta)半翅目(Hemiptera),繁殖速度快,广泛分布于世界各地,主要通过刺吸植物韧皮部汁液为生。前人研究中发现麦长管蚜Sitobion avenae孤雌蚜有翅和无翅个体中存在很多差异表达的微小RNA(microRNA,miRNA)。为进一步研究这些miRNA在蚜虫翅型分化中的调控机制,本研究以豌豆蚜Acyrthosiphon pisum为研究对象,选择在麦长管蚜中差异表达显著,且靶基因为蜕皮激素、胰岛素信号通路及翅型发育关键基因的5个miRNA(Let-7、miR-92a、miR-92b、miR-92a-1-p5和miR-277),使用miRanda和RNAhybrid软件在豌豆蚜中预测其靶基因。同时,利用qPCR检测这些miRNA及其靶标基因在豌豆蚜3⁴龄幼蚜和成虫有翅和无翅个体中的表达谱。然后在外源HEK293细胞系中,通过双荧光素酶活性检测法上述miRNA的靶基因进行验证。最后用蜕皮激素(20E)处理豌豆蚜2龄幼蚜,检测5个miRNA及其靶标基因在处理后表达量的变化,探索蜕皮激素如何通过miRNA调控蚜虫翅型分化。主要研究结果...

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献与综述
    1.1 蚜虫概述
        1.1.1 蚜虫
        1.1.2 豌豆蚜
    1.2 蚜虫的翅多型现象
    1.3 蚜虫的翅型分化调控
    1.4 蜕皮激素对miRNA及翅型的调控
    1.5 miRNA
        1.5.1 miRNA简介
        1.5.2 miRNA的发现
        1.5.3 miRNA的作用机制
        1.5.4 miRNA靶基因的预测
        1.5.5 miRNA靶基因验证
    1.6 RNAi概述
    1.7 研究的目的与意义
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
    2.2 实验仪器
    2.3 实验试剂及溶液配制
    2.4 实验方法
        2.4.1 豌豆蚜的饲养和蜕皮激素处理
        2.4.2 总RNA的提取
        2.4.3 数据分析与引物设计
        2.4.4 miRNA靶基因预测及验证
        2.4.5 实时荧光定量PCR检测
        2.4.6 基因克隆
        2.4.7 细胞培养和转染
        2.4.8 豌豆蚜RNAi
第三章 结果与分析
    3.1 豌豆蚜miRNA靶基因的预测
    3.2 miRNA在豌豆蚜不同龄期及有翅和无翅个体中的表达谱
    3.3 miRNA靶基因在豌豆蚜不同龄期有翅和无翅个体中的表达谱
    3.4 miRNA与靶标体外互作验证
        3.4.1 Let-7 与靶基因abrupt的互作验证
        3.4.2 miR-92a-1-p5 与靶基因flightin体外互作验证
    3.5 蜕皮激素处理对miRNA及靶标表达的影响
    3.6 蜕皮激素处理对靶基因表达的影响
第四章 讨论与展望
    4.1 讨论
        4.1.1 miRNA和靶基因在不同龄期及有翅和无翅个体中的表达谱结果分析
        4.1.2 miRNA靶基因的验证分析
        4.1.3 蜕皮激素处理对miRNA和靶基因表达的影响分析
        4.1.4 豌豆蚜RNAi结果分析
    4.2 展望
参考文献
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢



本文编号：3957671