表达维氏气单胞菌OmpAⅠ基因重组干酪乳杆菌的构建及免疫学评价

发布时间：2024-04-18 18:47

　　维氏气单胞菌(Aerornonas veronii,AV)是多数水生动物的病原菌之一,在某些条件下也可引起人类感染发病。由于该菌可引起多种鱼类感染发病,严重危害着养殖业的健康发展。由于抗生素耐药性及感染鱼类后可快速传播等问题,在水产养殖中接种疫苗仍是最有效的预防细菌感染鱼类的方式之一。在与细菌毒力相关的多种毒力因子中,由于外膜蛋白(outer membrane protein)暴露于菌体表面且与细菌致病性密切相关,被广泛地应用于疫苗开发研究中。本研究克隆了A.veronii TH0426株OmpAⅠ基因,通过分子生物学技术构建了OmpAⅠ基因的原核表达载体,以鲤鱼源干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)作为外源基因表达载体,分别构建了Lc-pPG-1-OmpAⅠ表面表达型与Lc-pPG-2-OmpAⅠ分泌表达型重组乳酸菌,通过Western blotting与间接免疫荧光验证Omp AⅠ基因在乳杆菌中的表达情况。结果显示,经PCR扩增出约1000 bp OmpAⅠ基因,两种重组乳杆菌表达的约45 kDa蛋白具有良好的反应原性,荧光显微镜下可在Lc-pPG-1-OmpAⅠ菌...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1OmpAI基因的PCR扩增M：DL2000DNAMarker；1：PCR扩增产物；2：阴性对照

根据样品数量，以50：1比例将加到96孔板中；向孔板中加入200μLBCA工作液，37℃放置定性分析Lc-pPG-2-OmpAⅠ重组菌分别厌氧培养8h，再以相同比例转提取质粒送至长春库美生物公引物进行PCR扩增，经电泳检

图1.2pMD-18T-OmpAⅠ质粒提取结果

图1.2pMD-18T-OmpAⅠ质粒提取0DNAMarker；1-4：pMD-18T-OmeparationofrecombinantplasmidofpDL5000DNAMarker;1-4:recombin增与酶切鉴定，进行目的基因的PCR扩....

图1.3pMD-18T-OmpAⅠ重组质粒PCR扩增与酶切鉴定结果

20pMD-18T-OmpAⅠ重组质粒PCR扩增与酶切鉴DNAMarker；1：重组质粒酶切鉴定；2：重组dentificationofrecombinantplasmidpMD-18T-OPCRanddigestedwithrestrictionenzy....

图1.4重组质粒pET30a-OmpAI的鉴定M1：DL2000DNAMarker；M2：λ-HindIIIDNAMarker

图1.4重组质粒pET30a-OmpAI的鉴定DL2000DNAMarker；M2：λ-HindIIIDNA组质粒PCR产物；2：pET30a-OmpAI双酶4IdentificationofrecombinantplasmidpET30a:DL....

本文编号：3957593