上海株ORFV双基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究

发布时间：2024-06-30 08:05

　　目的羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒引起绵羊和山羊的一种接触性人畜共患的传染病,该病在世界范围内广泛存在,严重地危害了养羊业的发展和人类的健康。本研究拟对上海崇明地区羊口疮病毒进行分离鉴定,对分离毒株的重要基因进行序列分析,以期确定该地区羊口疮流行株的特征;以其为目的基因构建羊口疮重组腺病毒,对其进行免疫学评价,为羊口疮核酸疫苗的研制奠定理论基础。方法采集上海崇明地区疑似羊口疮病毒感染的羔羊唇部结痂组织,应用PCR、MDBK细胞分离培养、电子显微镜观察、间接免疫荧光等技术进行病毒的分离鉴定,并对两株上海分离毒株保护性抗原基因F1L、B2L基因进行克隆与序列分析、构建系统进化树。应用PCR扩增ORFV-F416毒株的F1L、B2L目的基因,构建重组腺病毒穿梭质粒,穿梭质粒与骨架质粒共转染HEK-293细胞,包装出ORFV重组腺病毒。将重组腺病毒感染MDBK细胞,以Karber法测定病毒效价,采用PCR、IFA和Western-blotting对重组腺病毒进行表达检测,同时免疫接种小鼠,通过免疫指标的检测和攻毒保护试验进行免疫效果评价。结果1、成功分离到两株ORFV,分别命名为ORFV-F4...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-1结痂中ORFVF1L和B2L基因的PCR扩增结果

结痂中ORFVF1L和B2L基因的PCRmplificationresultsofF1LandB2LofORrker；1~2：F1L基因；3：FIL阴性对照；4~5：B2L基获得的2株病毒，分别命名为OR有明显的CPE，细胞出现融合、肿”....

图2-2ORFV在MDBK细胞上引起的病变效Fig.2-2CytopathyofORFVonMDBKcellsABC

Fig.2-1PCRamplificationresultsofF1LandB2LofORFVinthescabs注：M：DL2000Marker；1~2：F1L基因；3：FIL阴性对照；4~5：B2L基因；6：B2L阴性对照2.2ORFV....

图2-3感染后MDBK细胞的超微结构

图2-3感染后MDBK细胞的超微结构Fig.2-3UltrastructureofMDBKcellsafterinfection注：A：ORFV-F416株；B：ORFV-F429株4IFA检测ORFV在感染细胞内的分布情况

图2-4间接免疫荧光检测ORFV在被感染MDBK细胞中的分布

Fig.2-3UltrastructureofMDBKcellsafterinfection注：A：ORFV-F416株；B：ORFV-F429株.4IFA检测ORFV在感染细胞内的分布情况待感染ORFV的MDBK细胞CPE稳定后，通过间接免....

本文编号：3998571