烟草NaD1基因克隆及结构分析

发布时间：2024-07-04 23:13

　　NaD1(Nicotiana alata Defensin 1)蛋白是一种在花烟草(Nicotiana alata)花中发现的植物防御素。其对多种植物病原菌及人类病源性真菌具有抗性,同时还具有撕裂癌细胞的功能,在植物学和医学研究中均具有重要的价值。本研究以花烟草为材料克隆NaD1基因并进行深入研究,取得如下结果:1.NaD1基因克隆及结构分析根据已经报道的NaD1基因序列,提取mRNA反转cDNA,利用同源克隆法克隆花烟草NaD1基因编码序列进行克隆,分析表明该序列长为318 bp,与已知的NaD1基因编码序列的同源性为100%。该基因共编码105个氨基酸,其中丙氨酸(A)含量最高(12.4%),谷氨酸(E)含量次之(10.7%),其他氨基酸含量相对较低。分析发现NaD1为不稳定的疏水性蛋白,相对分子质量为11.7kD,理论等电点pI为6.56,具有信号肽(第4-21位氨基酸)、跨膜结构及多个磷酸化位点;其二级结构中3个ɑ-螺旋及1个β-折叠,符合植物防御素的结构特征。利用同源克隆技术,以花烟草基因组DNA为模板,克隆了NaD1基因的基因组DNA序列,分析表明其大小为514 bp,包含...

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
    1 前言
    2 NaD1蛋白简介
        2.1 NaD1蛋白编码基因克隆及蛋白结构研究
        2.2 NaD1蛋白的作用及作用机制
    3 内含子
        3.1 内含子的分类
        3.2 内含子的功能
    4 真核生物启动子
        4.1 真核生物启动子的组成
        4.2 启动子的克隆方法
        4.3 启动子的研究方法
    5 本研究的目的及意义
第二章 花烟草NaD1基因的克隆及结构分析
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料
        2.2 主要试剂与仪器设备
        2.3 引物
        2.4 试验方法
    3 结果与分析
        3.1 NaD1基因全长编码序列克隆
        3.2 NaD1基因生物信息学分析
        3.3 NaD1基因dna序列克隆
        3.4 NaD1基因的基因结构及内含子序列分析
        3.5 NaD1基因启动子片段克隆
        3.6 NaD1基因启动子的转录起始位点及顺式作用元件的预测
        3.7 NaD1基因启动子转录活性验证
    4 讨论
第三章 NaD1基因在花烟草不同器官中的表达研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料
        2.2 主要试剂与仪器设备
        2.3 引物
        2.4 试验方法
    3 结果与分析
        3.1 荧光定量pcr引物的筛选
        3.2 NaD1基因在花烟草不同器官中的表达分析
    4 讨论
第四章 结论、创新点与研究展望
    1 结论
    2 创新点
    3 研究展望
参考文献
附录一
附录二
致谢



本文编号：4000675