基于CRISPR/Cas9敲除及激活人结肠癌细胞HSF2基因并探索HSF2在黏膜损伤修复中的作用机制

发布时间：2024-11-14 18:47

　　[目的]利用CRISPR/Case9 HSF2基因敲除/激活质粒敲除/激活人结肠癌细胞株(HCT-116)中热休克转录因子 2(Heat Shock Transcription Factor 2,HSF2)的表达,构建出HSF2基因敲除的稳定细胞株/增加细胞HSF2的表达,分析探讨HSF2对细胞增殖及肠道黏膜损伤修复相关细胞因子、蛋白表达的影响及相关信号通路的研究。[方法]1.选用人结肠癌细胞株(HCT-116)为研究对象,利用CRISPR/Cas9基因敲除质粒 HSF2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid(h)和 HSF2 HDR Plasmid(h)共转染HCT-116细胞,破坏细胞HSF2基因的表达,经加药(嘌呤霉素)及反复挑选后,构建出HSF2基因敲除的稳定细胞株,去除HSF2蛋白表达的影响,将细胞分为正常对照组、敲除组和敲除阴性对照组;2.利用 HSF2 激活质粒 HSF2 CRISPR Activation Plasmid(h)转染 HCT-116 细胞,使HCT-116中的HSF2蛋白表达量增加,建立HSF2激活细胞株,将细胞分为正常对照组、激活组和激活阴性对照组...

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