无毒基因在稻瘟病菌株007中的克隆鉴定及表达分析

发布时间：2024-12-10 01:20

　　 为了能明确稻瘟病国际标准菌株race 007中包含的无毒基因及其可能的主效无毒基因,本研究设计5个常见的无毒基因特异性引物进行克隆鉴定,并分别检测液体培养条件下和侵染水稻过程中race 007菌株中5个无毒基因的表达情况。本研究发现,稻瘟病菌株race 007中含有PWL2、AvrPiz-t、Avrpik、Avr-pita、ACE1 5个无毒基因,克隆鉴定的结果表明这5个无毒基因的变异不大。相比较于液体培养条件下,在侵染水稻的过程中,PWL2表达上调,ACE1、AvrPiz-t、Avr-Pik表达基本不变,而Avr-Pita基因表达出现了下调。因此PWL2基因表达变化较为显著,本研究进一步对PWL2启动子区域进行分析,结果表明该PWL2基因启动子区域存在着一些顺式作用元件来影响PWL2基因的表达。本研究表明,稻瘟病菌race 007含有5种常见的无毒基因且序列变异不大,而且PWL2基因的表达是受到调控并可能发挥主要的致病作用。

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【部分图文】：

图3 无毒基因在race 007液体培养中的表达量分析

图2第3、5、7天race007的菌丝形态（放大倍数10×10)2.3稻瘟病菌race007侵染水稻后无毒基因的表达量鉴定

图4 早、中期水稻叶片侵染状况(Bars=1 cm)

如图4所示，稻瘟病病菌race007菌株侵染水稻后，在早期出现较小的菌斑，中期出现较明显的病斑，侵染发展过程明显。提取侵染日本晴水稻叶片早、中期的菌斑叶片的RNA，反转成cDNA，用目的基因引物进行PCR扩增，结果如图5。在随着侵染时间的延长，PWL2有比较明显的表达上调，AC....

图5 稻瘟病菌race 007侵染水稻后无毒基因的表达量鉴定

本实验研究结果表明稻瘟病菌株race007中存在PWL2、AvrPiz-t、Avr-pik、Avr-pita、ACE15个无毒基因，因此本实验以这5个无毒基因作为研究对象进行分析和讨论。从这5个无毒基因的测序结果中，说明这5个无毒基因与已经报道出来的无毒基因相似度较高，这也反....

图2 第3、5、7天race 007的菌丝形态（放大倍数10×10)

如图2所示，稻瘟病病菌race007菌株在液体培养条件下生长良好，因此提取液体培养第3、5、7天（分别为菌体生长的早、中、晚期）的菌丝RNA，反转成cDNA，用目的基因引物进行荧光定量PCR分析，结果如图3。结果表明，随着液体培养时间的延长，ACE1、Avr-Pita基因表达量....

本文编号：4015376