利用CRISPR/Cas9技术制备成对框基因2敲除小鼠

发布时间：2024-12-22 22:12

　　 目的利用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/重组CRISPR相关核酸酶9(Cas9)技术双切口法制备成对框基因2(Pax2)敲除小鼠,为探讨Pax2基因在多个系统发育的作用提供动物模型。方法根据Pax2基因序列设计sgRNA,设计出的sgRNA和Cas9体外转录后显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,F0代小鼠出生后取其基因DNA测序鉴定基因型。共获得8只F0代小鼠,使敲除成功的F0代小鼠与野生C57BL/6J小鼠交配,获得F1代小鼠,后均采用基因成功敲除的小鼠与C57BL/6J小鼠进行交配,可获得稳定的Pax2基因敲除小鼠。结果成功获得可稳定繁殖的Pax2杂合子基因敲除小鼠,其Pax2基因缺失1628 bp;组织HE染色显示,敲除小鼠的肾小球数量明显减少; Western blotting结果显示,敲除小鼠的肾皮质Pax2蛋白表达较野生型小鼠减少。结论利用CRISPR/Cas9技术可成功构建Pax2杂合子基因敲除小鼠,为进一步研究Pax2基因的作用奠定基础。

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【文章目录】：
材料和方法
    1．材料
    2．方法
        2.1 F0代小鼠的生成:
        2.2 F0代小鼠鉴定:
        2.3 Pax2杂合子基因缺失小鼠的繁育:
        2.4小鼠组织HE染色:
        2.5 Western blotting检测:
    3．结果分析
结果
    1．成功构建Pax2杂合子基因缺失小鼠
    2.Pax2杂合子基因缺失小鼠的生长繁殖
    3. Pax2杂合子基因缺失小鼠肾脏发育障碍
    4. Pax2杂合子基因缺失小鼠肾皮质Pax2蛋白表达减少
讨论



本文编号：4019803