酸鱼中产胺菌的氨基酸脱羧酶基因及功能特性研究

发布时间：2024-12-22 22:45

　　生物胺形成是酸鱼重要的安全隐患,肠细菌是非常重要的产生物胺菌,其分泌多种氨基酸脱羧酶脱羧对应氨基酸产生相应的生物胺。目前国内外对鲜鱼中产胺微生物研究较多,但对于发酵鱼制品中发酵过程中产胺微生物研究较少。本研究通过聚合酶链氏反应(PCR)对中国传统发酵酸鱼中肠细菌进行氨基酸脱羧酶基因多样性检测,利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)检测生物胺含量;研究了pH对肠细菌产生物胺类型和能力的影响,以及酸胁迫下各产胺途径的关系;研究K.aerogenes 10C2组氨酸脱羧酶的酶学性质;研究K.aerogenes10C2组氨酸脱羧酶基因克隆和生物信息学分析。具体内容及结果如下:(1)本研究测定了酸鱼中97株肠细菌的生物胺形成能力。研究结果表明,97株菌产大量腐胺、尸胺、组胺。将97株菌按产生物胺能力的强弱分为4个等级,大肠菌产腐胺最多,其次是组胺、尸胺。在产腐胺方面,产腐胺含量大于900 mg/l的占33.0%(32/97),产腐胺含量大于500 mg/l的占81.4%(79/97)。产组胺含量在100-500 mg/L之间占41.2%(40/97)。然而,没有一个产尸胺大于500 mg/L的,产...

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【部分图文】：

图5-8 hdc-1的跨膜结构预测

跨膜受体是参与细胞与外界通信的特殊整合膜蛋白,在信号转导中发挥重要作用。向TMHMMServerv.2.0(http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM-2.0/)网站提交hdc-1的氨基酸序列,结果见Fig.5-8。由图可知,跨膜螺旋区(TMHs....

图5-9 hdc-1的二级结构预测

蛋白质的亚细胞定位对我们研究蛋白提取方式及其它研究及其重要,只有搞清楚该酶为胞内酶还是胞外酶,我们才能更好的制定酶的提取方式和拟定注意事项。Cell-PLoc2.0(http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/)是一款快速预测....

图5-10 hdc-1的亚细胞定位预测

图5-9hdc-1的二级结构预测5.3.11pET15b/hdc-1的重组质粒构建

图5-11 p ET 15b载体图谱

NdeI/XhoI作为酶切位点,将目的基因片段hdc-1和pet15b进行双酶切。将酶切后的hdc-1和pet15b连接过夜,连接液电转化至TOP10感受态细胞,将菌液涂布至含有抗生素的LA培养基,37℃下倒置培养过夜,筛选阳性克隆体。提取其质粒,用NdeI和XhoI酶进行....

本文编号：4019844