CCDC67基因在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

发布时间：2017-07-04 01:08

  本文关键词：CCDC67基因在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

  更多相关文章： 甲状腺癌 分化型甲状腺癌 CCDC67基因 BRAF突变

【摘要】：背景及目的近年来,甲状腺癌的发病率呈现逐年上升的趋势,而且作为高发性内分泌系统最常见的肿瘤,越来越引起人们的关注。甲状腺癌的主要病理类型包括:分化型甲状腺癌、未分化甲状腺癌和来源于滤泡旁C细胞的甲状腺髓样癌,分化型甲状腺癌又由甲状腺乳头状癌、滤泡状甲状腺癌组成。其中,分化型甲状腺癌占所有甲状腺癌的90%以上,是一种常见的、多样化的内分泌恶性肿瘤。研究发现大多数分化型甲状腺癌的患者存在着一定可治愈性,但是复发率相对较高,大约在10%~30%,而且5%的患者对常规的治疗是无法治愈的,所以我们需要找到有效治疗此类患者的方法。在过去的20年里,甲状腺癌分子生物学取得显著进展,大量的甲状腺癌发生、发展相关突变基因被发现。因此,我们需要进一步了解这些基因在甲状腺癌中的作用机制以及与临床的相关性,为分化型甲状腺癌的治疗奠定基础,并将这些知识从理论转移到临床决策中去。最近一项研究表明位于11号染色长臂体上的CCDC67基因是一个新的候选抑癌基因,而且发现其在胃癌、乳腺癌等恶性肿瘤中表达缺失或降低,但是其在甲状腺癌中的研究却鲜有报道。因此,本实验首先在细胞学水平,通过实时荧光定量PCR技术对分化型甲状腺癌细胞株中CCDC67mRNA的表达情况进行分析;然后通过细胞免疫荧光技术检测CCDC67蛋白在分化型甲状腺癌中的表达分布情况。接着,收集临床甲状腺癌组织学标本,通过免疫组化技术检测CCDC67基因在临床甲状腺癌患者中的表达情况,并结合临床病理特征分析其相关性。最后,进一步探索CCDC67基因在甲状腺肿瘤中的分子作用机制,提取将标本中的DNA,通过DNA测序技术检测CCDC67与甲状腺癌经典基因BREAF V600E的相关性,接着用慢病毒转染甲状腺乳头状癌细胞,使得细胞中的CCDC67过表达,并分析转染前后甲状腺乳头状癌中凋亡相关因子的表达情况。这些为判定CCDC67基因在甲状腺肿瘤中的作用,其是否可以作为甲状腺癌的抑癌基因,以及基因学靶向治疗等方面奠定了一定的理论依据。材料与方法1、采用实时荧光定量PCR检测分化型甲状腺癌细胞株(TCP-1、FTC-133)CCDC67mRNA的表达情况,与正常甲状腺细胞株(Nthy-ori 3-1)进行比较。2、细胞免疫荧光技术检测分化型甲状腺癌细胞株(TCP-1、FTC-133)CCDC67蛋白的表达及分布情况,与正常甲状腺细胞株(Nthy-ori 3-1)进行比较。3、收集临床60例临床甲状腺癌组织学标本。通过免疫组化技术检测CCDC67基因在临床甲状腺癌患者的手术组织切片中的表达情况,并分析其与临床病理的相关性。4、提取组织标本中的DNA,通过DNA测序技术检测CCDC67基因与甲状腺癌经典基因BREAF V600E的相关性。5、构建CCDC67过表达的TPC-1细胞,通过RT-PCR技术检测转染前后凋亡相关因子Bcl-2、Bax的变化。6、采用SPSS21.0统计学软件对实验中的数据进行统计分析,其中两样本率的比较采用卡方检验,用单因素方差分析对多样本进行比较,用t检验对两组定量资料进行比较,以P0.05为彼此差异有统计学意义。结果1、与正常甲状腺细胞株(Nthy-ori 3-1)相比,在分化型甲状腺癌细胞株中(TPC-1、FTC-133)CCDC67 mRNA表达明显降低,P0.05。2、与正常甲状腺细胞株(Nthy-ori 3-1)相比,在分化型甲状腺癌细胞株中(TPC-1、FTC-133)CCDC67蛋白表达明显降低,P0.05,CCDC67蛋白分布在细胞质和细胞核。3、60例癌旁正常甲状腺组织中均出现CCDC67蛋白的表达,PTC组织中52%(31/60)出现CCDC67蛋白的表达缺失,CCDC67蛋白表达的缺失情况与患者的TNM分期、组织病理分级以及淋巴结是否转移有关(P0.05)4、CCDC67的低表达与BRAF突变正相关,r=0.707,P0.05。5、慢病毒转染TPC-1细胞获得CCDC67高表达,使得Bcl-2 mRNA表达降低,Bax mRNA表达升高,P0.05。结论CCDC67基因在甲状腺乳头状癌中表达缺失,缺失表达CCDC67的患者与其TNM分期、病理分级以及淋巴结转移有关,而且与经典BRAF基因突变正相关,通过慢病毒转染TPC-1获得高表达的CCDC67后,使得TPC-1恶性表型受到逆转,促进了TPC-1细胞凋亡的形成,证实了CCDC67基因作为甲状腺乳头状癌的一个抑癌基因。
【关键词】：甲状腺癌 分化型甲状腺癌 CCDC67基因 BRAF突变
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R736.1
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 缩略词表12-13
• 引言13-16
• 第一部分 CCDC67基因在分化型甲状腺癌细胞株的表达情况16-30
• 一 一般资料16-19
• 1 研究对象16
• 2 实验试剂及仪器16-18
• 3 实验所需溶液的配置18-19
• 二 实验方法19-25
• 1 细胞复苏、培养、冻存19-20
• 2 Real Time PCR（RT-PCR，实时聚合酶链反应）20-24
• 3 免疫荧光技术24
• 4 统计学方法24-25
• 三 实验结果25-28
• 1 RNA完整性25
• 2 Real Time-PCR检测结果25
• 3 细胞免疫荧光技术检测结果25-28
• 四 讨论28-29
• 五 结论29-30
• 第二部分 CCDC67基因在甲状腺乳头状癌组织标本中的表达情况30-37
• 一 一般资料30-31
• 1 实验对象30
• 2 临床分期及分级30
• 3 实验试剂及仪器30-31
• 4 实验所需溶液的配置31
• 二 实验方法31-33
• 1 免疫组织化学SP法31-33
• 2 统计学方法33
• 三 实验结果33-36
• 1 免疫组化结果33-34
• 2 PTC中CCDC67蛋白的表达与临床病理特征的关系34-36
• 四 讨论36
• 五 结论36-37
• 第三部分 CCDC67基因对TPC-1 细胞生物学功能的影响37-48
• 一 一般资料37-38
• 1 研究对象37
• 2 实验主要试剂和仪器37-38
• 3 DNA提取所需溶液配制38
• 二 实验方法38-41
• 1 DNA测序38-40
• 2 慢病毒转染CCDC67基因对TPC-1 细胞生物学功能的影响40-41
• 3 统计学方法41
• 三 实验结果41-44
• 1 DNA测序结果41
• 2 CCDC67基因与BRAF在甲状腺乳头状癌中的表达相关性分析41
• 3 Real Time-PCR检测慢病毒转染TPC-1 前后凋亡相关基因的表达41-44
• 四 讨论44-47
• 五 结论47-48
• 全文总结48-49
• 参考文献49-54
• 综述 甲状腺癌靶向研究的热点与展望54-68
• 参考文献62-68
• 个人简历68-70
• 致谢70

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 肖晖;分化型甲状腺癌预后因素的研究状况[J];北京医学;2001年01期

2 范西红,贾士铨,刘少兰,单礼成;放射性~(131)I对分化型甲状腺癌的治疗[J];中华普通外科杂志;2001年03期

3 王雪晨,姚永忠;分化型甲状腺癌局部侵犯特点及手术治疗[J];江苏医药;2003年10期

4 姚永忠,王雪晨;分化型甲状腺癌误诊及再手术的探讨[J];实用临床医药杂志;2003年06期

5 郭海鹏,杨熙鸿,陈伟正,林建英,尹秋艳;分化型甲状腺癌死亡因素分析[J];哈尔滨医药;2004年04期

6 王金卫,陈逸韶,陈辉兵,陈学荣;分化型甲状腺癌53例诊治分析[J];浙江临床医学;2005年05期

7 卢受强,蒋仁晶;大剂量~(131)碘辅助治疗分化型甲状腺癌的临床体会[J];广西医学;2005年07期

8 殷德涛,卢秀波,邱新光,王庆兆,李德旭;分化型甲状腺癌中脆性组氨酸三联体基因表达及其意义[J];中华实验外科杂志;2005年11期

9 纪宗正;;分化型甲状腺癌的诊断和治疗[J];临床外科杂志;2006年03期

10 陈福进;李秋梨;曾宗渊;宋明;杨安奎;张诠;陈艳峰;欧阳电;;分化型甲状腺癌的多因素预后分析[J];中山大学学报(医学科学版);2006年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 罗全勇;余永利;陈立波;陆汉魁;朱瑞森;;分化型甲状腺癌~(131)I治疗后外周血淋巴细胞亚群的变化[A];第二届全国核素显像及治疗学术会议论文摘要汇编[C];2004年

2 李树春;董慧蕾;李振东;;分化型甲状腺癌三个危险组的划分及其与治疗和预后的关系[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

3 吕朝晖;;分化型甲状腺癌术后的长期管理[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年

4 张学敏;马丽;陈正福;;分化型甲状腺癌术后~(131)I治疗的疗效评价及临床应用[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年

5 崔坤炜;高再荣;;影响分化型甲状腺癌~(131)I治疗疗效常见因素分析[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年

6 国兰兰;高沁怡;李亚明;;影响分化型甲状腺癌~(131)I治疗转移灶疗效的因素分析[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年

7 郭一玲;张英男;辛镇绂;;~(131)I治疗分化型甲状腺癌时~(131)I在血液内清除时间的研究[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年

8 肖海鹏;;分化型甲状腺癌的内科治疗[A];中华医学会第十一次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2012年

9 华清泉;;浅谈分化型甲状腺癌诊疗对策与思考[A];中国中西医结合学会耳鼻咽喉科专业委员会第十三次学术会议、浙江省中西医结合学会耳鼻咽喉科专业委员会第十一次学术会议论文汇编[C];2013年

10 陈健;;关于分化型甲状腺癌风险分层的认识和思考[A];湖北省抗癌协会青年委员会第五届青年学术论坛资料汇编[C];2013年

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 石岚;分化型甲状腺癌的规范化综合治疗[D];华中科技大学;2008年

2 袁耿彪;维甲酸和曲古抑素联合诱导甲状腺癌细胞分化基础研究及维甲酸诱导分化型甲状腺癌的初步临床应用[D];四川大学;2006年

3 张浩然;~（131）I-chTNT靶向治疗分化型甲状腺癌肺转移瘤的临床应用研究[D];吉林大学;2010年

4 赵国庆;～（99m）Tc-MIBI及～（99m）Tc-HL91显像与分化型甲状腺癌清甲后复发的关系及机制研究[D];吉林大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 张海英;放射性~(134)Ⅰ治疗分化型甲状腺癌的辐射防护剂量学研究[D];北京协和医学院;2015年

2 原榛;血清sIL-2R、VEGF与分化型甲状腺癌的相关性研究[D];山西医科大学;2015年

3 惠金子;Tg、TgAb及TSH在分化型甲状腺癌术前的预测分析[D];山西医科大学;2015年

4 闫慧娴;不同性别分化型甲状腺癌的临床特征比较分析及甲状腺乳头状癌敏感基因的筛选[D];中国人民解放军医学院;2015年

5 万华俊;分化型甲状腺癌颈中央区淋巴结转移相关因素分析[D];上海交通大学;2014年

6 邢怀广;VEGF、ES检测在分化型甲状腺癌术后转移及~(131)碘治疗中的应用价值[D];山东大学;2015年

7 熊芳;Pirh2与Her-2在分化型甲状腺癌中的表达及意义[D];湖南师范大学;2015年

8 罗琼;分化型甲状腺癌发生转移或放射性碘耐受后患者血清中趋化因子变化的研究[D];苏州大学;2015年

9 杨阳;分化型甲状腺癌颈淋巴结转移的风险因素[D];南京大学;2016年

10 姜昊e，

本文编号：515812