Wip1过表达转基因小鼠模型的制备与鉴定

发布时间：2017-07-04 01:00

  本文关键词：Wip1过表达转基因小鼠模型的制备与鉴定

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【摘要】：本研究旨在构建Wip1过表达转基因小鼠,并对Wip1过表达转基因小鼠进行RNA水平上的筛选,为研究动脉粥样硬化的发生机制提供一种动物模型。通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得小鼠组织的cDNA,并以其为模板进行PCR扩增,对扩增片段进行胶回收,然后进行扩增片段和空载体的双酶切,将酶切后胶回收得到的Wip1基因全长与载体pcDNA3.1(+)进行连接,获得Wip1-pcDNA3.1(+)过表达载体,最终得到Wip1过表达转基因原代小鼠,并利用Southern blotting方法和实时荧光定量PCR方法对小鼠进行鉴定筛选。试验获得Wip1过表达转基因原代小鼠30只,利用Southern blotting方法鉴定出阳性小鼠11只,阳性率为36.67%,实时荧光定量PCR筛选Wip1过表达转基因小鼠阳性率为32.84%。以上结果表明,试验成功构建了Wip1-pcDNA3.1(+)过表达载体,并且经过Wip1基因在小鼠组织DNA和RNA水平上的鉴定筛选,成功获得了Wip1过表达转基因小鼠。
【作者单位】： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;
【关键词】： Wip 过表达 小鼠模型
【基金】：国家自然科学基金(31572378)
【分类号】：R-332;R543.5
【正文快照】： 野生型P53诱导的蛋白磷酸酶1(wild-typep53-induced phosphatase,Wip1)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶,属于PP2C(serine/threonine spe-cific protein phosphatase type 2c,PP2C)家族,并由PPM1D(protein phosphatase magnesium-depend-ent 1delta,PPM1D)基因编码[1],在小鼠上,

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