apoE修饰阳离子脂质体介导HSV-tk基因对肝癌细胞的杀伤作用研究

发布时间：2017-07-17 14:03

  本文关键词：apoE修饰阳离子脂质体介导HSV-tk基因对肝癌细胞的杀伤作用研究

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【摘要】：目的:1.检测本实验室合成的基因载体apo E修饰脂质体(apo E-lipoplex)对肝(癌)细胞的结合特异性。2.构建包含自杀基因HSVtk的质粒pSurvivin-TK-PBI-CMV2,用apo E-lipoplex转染其进入肝(癌)细胞,检测HSVtk基因在细胞中的表达情况。3.检测apo E-lipoplex/HSVtk/GCV系统对肝癌细胞的靶向杀伤作用。方法:1.用apoE-lipoplex携带pGenesil-1质粒分别转染肝癌细胞HepG2、Huh-7和正常肝细胞HL-7702,宫颈癌细胞Hela,流式细胞仪检测转染率。2.用apoE-lipoplex携带pSurvivin-TK-PBI-CMV2质粒分别转染肝癌细胞HepG2、Huh-7和肝细胞HL-7702,RT-PCR检测HSVtk基因的mRNA表达水平,western blot检测HSVtk蛋白表达。3.apoE-lipoplex携带pSurvivin-TK-PBI-CMV2质粒转染肝癌细胞HepG2、Huh-7和肝细胞HL-7702,加入前体药物更昔洛韦(GCV)。2 d后流式细胞仪检测细胞凋亡率;MTT法检测细胞增殖;Hoechst染色后荧光显微镜下观察细胞形态变化。结果:1.apo E-lipoplex对肝癌细胞HepG2、Huh-7和肝细胞HL-7702的转染率相比宫颈癌细胞Hela更高,差异有统计学意义(P0.05)。2.apoE-lipoplex携带pSurvivin-TK-PBI-CMV2质粒转染肝癌细胞HepG2、Huh-7和肝细胞HL-7702后,HSVtk基因的mRNA和蛋白在两种肝癌细胞中均有明显表达,但在肝细胞HL-7702中均未检测到表达。3.流式结果表明,转染组肝癌细胞HepG2、Huh-7凋亡显著(P0.05);MTT结果表明,转染组肝癌细胞HepG2、Huh-7增殖减弱显著(P0.05);荧光显微镜下观察,转染组肝癌细胞有凋亡的特征性形态学改变。结论:1.apo E-lipoplex对肝(癌)细胞具有较高的转染率,有靶向性转染肝(癌)细胞的能力。2.相比肝细胞HL-7702,apo E-lipoplex介导的survivin启动子驱动的HSVtk基因在肝癌细胞HepG2、Huh-7中有特异性表达。3.apo E-lipoplex介导的pSurvivin-TK-PBI-CMV2质粒+GCV系统,对肝癌细胞HepG2、Huh-7有选择性杀伤作用,而对肝细胞HL-7702未见明显杀伤作用。本课题为国家自然科学基金“乳糜微粒定向介导TK基因载体系统对肝癌杀伤作用(编号:81172136)”。
【关键词】：肝细胞癌 apo E脂质体 survivin启动子 HSVtk基因
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要6-8
• abstract8-10
• 中英文缩略词对照表10-12
• 前言12-14
• 1 实验材料和仪器14-21
• 1.1 细胞株14
• 1.2 菌株及质粒14
• 1.3 主要试剂14-16
• 1.4 实验器材16-17
• 1.5 试剂配制17-21
• 2 实验方法21-33
• 2.1 质粒准备21-24
• 2.2 包裹及稳定性实验24-25
• 2.3 细胞培养25-26
• 2.4 细胞转染率测定26
• 2.5 转染后细胞内HSV-tk基因检测26-28
• 2.6 转染后细胞内HSV-tk蛋白检测28-30
• 2.7 流式细胞仪检测细胞凋亡情况30-31
• 2.8 Hoechst染色检测细胞形态变化31-32
• 2.9 MTT检测细胞增殖32
• 2.10 统计学分析32-33
• 3 实验结果33-47
• 3.1 质粒验证实验33-35
• 3.2 脂质体检测实验35-36
• 3.3 细胞实验36-47
• 4 讨论47-49
• 5 结论49-50
• 参考文献50-53
• 综述53-66
• 参考文献60-66
• 致谢66-67
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果67-68
• 个人简历68

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本文编号：553902