FoxM1基因表达沉默对T24细胞EMT的影响

发布时间：2017-08-02 20:18

  本文关键词：FoxM1基因表达沉默对T24细胞EMT的影响

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【摘要】：目的:选择膀胱癌T24细胞系为研究对象,观察T24细胞转录因子FoxM1基因表达沉默,对T24细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,初步探讨膀胱癌细胞EMT的发生机制。方法:构建FoxM1干扰质粒FoxM1-shRNA,通过脂质体lipofectamine2000介导,将FoxM1-shRNA质粒转染入T24细胞,转染48h后,采用RT-PCR及Western-blot方法,分别检测FoxM1mRNA、蛋白的表达情况,选择干扰效果最强组进行正式实验。将FoxM1-shRNA和NC-shRNA分别转染T24细胞,建立shRNA-FoxM1-T24及shRNA-NC-T24细胞系,以shRNA-FoxM1-T24为实验组,shRNA-NC-T24及未转染T24细胞为对照组。转染48小时后,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,RT-PCR及Western-blot从mRNA与蛋白质水平检测三组细胞FoxM1、E-cadherin及Vimentin的表达,并观察FoxM1基因表达降低对T24细胞EMT的影响。结果:1.RT-PCR和Western-blot结果显示,四组分别转染Fox M1干扰载体shRNA1、sh RNA2、shRNA3、shRNA4的T24细胞相对于空白及阴性对照组,FoxM1mRNA、蛋白的表达显著减少(P0.01),其中FoxM1-shRNA3的干扰效果最强,选其进一步实验。2.FoxM1mRNA、蛋白表达在FoxM1-shRNA3转染T24细胞48小时后显著减少,与空白及阴性对照组比较,差异有统计学意义(P0.01),提示T24细胞Fox M1基因表达沉默。高倍显微镜下,空白及阴性对照组细胞多呈现多角形,细胞孤立,间隙较大,表现为间质表型细胞,而FoxM1-shRNA3转染组细胞多呈现椭圆形,细胞聚集,间隙缩小,表现为上皮表型细胞。3.FoxM1-shRNA3转染T24细胞48h后,间质标记物Vimentin表达明显减少,而上皮标记物E-cadherin表达显著增加,与空白及阴性对照组比较,差异有统计学意义(P0.01),提示FoxM1基因表达沉默后,T24细胞由间质表型细胞向正常上皮表型细胞转化。结论:FoxM1可能是调控T24细胞EMT的转录因子;FoxM1基因表达沉默,可抑制T24细胞EMT的发生。
【关键词】：膀胱癌T24细胞 FoxM1转录因子 上皮间质转化
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 前言11-13
• 第2章 实验材料及方法13-29
• 2.1 实验材料13-17
• 2.2 实验方法17-29
• 第3章 实验结果29-37
• 第4章 实验讨论37-41
• 第5章 实验结论41-43
• 参考文献43-51
• 综述 FoxM1在泌尿系肿瘤中的研究进展51-61
• 参考文献57-61
• 硕士期间发表论文情况61-63
• 致谢63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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本文编号：611050