汉坦病毒Hunan03株S基因克

发布时间：2017-08-02 20:31

  本文关键词：汉坦病毒Hunan03株S基因克隆、表达及核蛋白免疫原性分析

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【摘要】：目的构建汉坦病毒Hunan03株核蛋白基因原核重组表达载体,在大肠杆菌中进行核蛋白表达,研究核蛋白的免疫性及免疫反应性。方法设计特异性扩增汉坦病毒Hunan03株S基因完整开放阅读框(ORF)的引物,RT-PCR扩增,产物克隆到pGM-T载体,转化感受态细胞TOP10,应用蓝白斑筛选、酶切、PCR鉴定,定向克隆到pGEX-6p-2原核表达载体,转化Ecoli.BL21StarTM(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot对重组蛋白进行鉴定。应用Glutathione Sepharose 4B纯化柱纯化重组蛋白,免疫新西兰兔,建立间接ELISA法对核蛋白的免疫原性与免疫反应性进行评价。结果 PCR扩增S基因ORF区域产物大小约1 306bp,重组载体pGEX-6p-2-S经双酶切、PCR、测序鉴定提示构建成功;在37℃,IPTG浓度为0.8mmol/L诱导5h的条件下,表达出最高量的相对分子量约74kDa的GST-NP融合蛋白。建立的间接ELISA法检测GST-NP融合蛋白免疫后的新西兰兔血清,IgM抗体滴度达1∶8 000,IgG抗体滴度达1∶16 000。结论成功构建了高效表达的汉坦病毒S基因重组表达载体,获得了纯度较高具有较好的免疫原性与免疫反应性的核蛋白,为后续汉坦病毒单克隆抗体的制备奠定了基础。
【作者单位】： 湖南省疾病预防控制中心 湖南省微生物分子生物学重点实验室;中南大学基础医学院;
【关键词】： 汉坦病毒 S基因 原核表达 核蛋白免疫原性
【基金】：湖南省科技厅科研基金(No.2013TT2016)资助~~
【分类号】：R373
【正文快照】： 湖南省科技厅科研基金(No.2013TT2016)资助(1.Hunan Provincial Center for Disease Control and Prevention,the Key Laboratory of Microbial Molecular Biology of Hunan Province,Changsha410005,China;2.School of Basic Medical Science,Central South University,Chang，

本文编号：611121