沙门菌sopB基因缺失株的构建及其对巨噬细胞炎性体活化的影响

发布时间：2017-08-05 05:24

  本文关键词：沙门菌sopB基因缺失株的构建及其对巨噬细胞炎性体活化的影响

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【摘要】：沙门菌是一种革兰氏阴性兼性细胞内的细菌病原体,具有广泛的宿主谱,在全球范围内感染病例中均表现出有较高的发病率和死亡率。沙门菌的致病性主要依赖于其侵袭细胞及在细胞内生存的能力。而这又依赖于其两个毒力岛SPI-1及SPI-2编码的两个III型分泌系统(T3SS)。T3SS具有分泌和转导多种细菌毒力因子进入宿主细胞的功能。Sop B是SPI-1重要的分泌毒力因子,具有肌醇磷酸酶活性,在沙门菌侵入过程中可诱导多种磷酸肌醇的去磷酸化作用。Sop B已经被证明在侵染过程中影响多种细胞通路,包括细胞膜褶皱形成及抑制SCV与溶酶体的融合等。目前,对于Sop B功能的研究主要关注于其在沙门菌侵染及胞内存活过程中的作用。虽然有研究表明Sop B能够影响多种对炎性反应有调控作用的细胞信号通路,但Sop B是否影响炎性反应的报道仍不多见。炎性体是天然免疫系统的重要组成部分。炎性体是一种多蛋白复合体,在感染或应激条件下,促进促炎细胞因子成熟释放。炎性体组成包括:受体,接头蛋白及效应因子caspase-1。PRRs,包括NLR家族及ALR家族等都能启动炎性体的组装。活化的NLR或ALR促进ASC的聚集,而ASC的聚集招募caspase-1进入ASC斑点,启动caspase-1的自溶性活化,从而诱导的IL-1β及IL-18的蛋白水解过程。作为宿主重要的防御机制,炎性体的活化受到多种因素的严格调控,例如:受体的自抑制及修饰作用。病原同样可以利用毒力因子抑制炎性体功能,从而达到免疫逃逸的目的。既然,Sop B蛋白在沙门菌侵染及维持胞内存活都具有重要的作用,其是否影响沙门菌诱导的炎性体活化。因此,本研究利用λRed重组系统对沙门菌SL1344进行Sop B编码基因的敲除,并以低拷贝的p STV28为表达载体分别构建了全长sop B基因回补质粒及sop B突变回补质粒。随后,将回补质粒电转至△Sop B菌株中,由此成功获得三株重组菌株,包括△Sop B::Vect,△Sop B::Sop B及△Sop B::C460S。炎性体活化试验中,为了探究Sop B蛋白是否影响沙门菌诱导的炎性体。应用ELISA方法检测Sop B对沙门菌诱导的IL-1β进行测定,LDH的释放分析细胞死亡,并应用Western blot分析caspase-1、IL-1β、AKT的活化情况及ASC寡聚化水平。免疫荧光分析ASC斑点形成水平等。结果显示沙门菌毒力因子Sop B通过诱导AKT信号活化显著抑制沙门菌诱导的炎性体活化。
【关键词】：沙门菌 SopB 炎性体 AKT信号 抑制
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.61
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 前言12-13
• 第一篇 文献综述13-29
• 第一章 炎性体的研究进展13-25
• 1.1 炎性体13-14
• 1.2 炎性体活化14-16
• 1.3 炎性体的信号调节16-24
• 1.4 小结24-25
• 第二章 沙门菌及毒力因子SopB25-29
• 2.1 沙门菌25-26
• 2.2 沙门菌Ⅲ型分泌系统及效应因子26-27
• 2.3 毒力因子SopB27-28
• 2.4 小结28-29
• 第二篇 研究内容29-61
• 第一章 鼠伤寒沙门菌sopB基因敲除株及回补株的构建29-41
• 1.1 材料与方法29-36
• 1.2 实验结果36-40
• 1.3 讨论40
• 1.4 小结40-41
• 第二章 沙门菌毒力因子SopB抑制沙门菌诱导的炎性体活化41-61
• 2.1 材料与方法41-54
• 2.2 结果54-58
• 2.3 讨论58-60
• 2.4 小结60-61
• 结论61-62
• 参考文献62-77
• 导师简介77-78
• 作者简介78-79
• 致谢79

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1 宋佩p，

本文编号：623367