铁皮石斛HDS基因的克隆与初步表达分析

发布时间：2017-08-08 17:05

  本文关键词：铁皮石斛HDS基因的克隆与初步表达分析

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【摘要】：目的从铁皮石斛Dendrobium officinale中克隆4-羟基-3-甲基-2-E-丁烯基-1-焦磷酸合成酶(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1-yl diphosphate synthase,HDS)基因,在大肠杆菌中诱导融合蛋白,并探究该基因在铁皮石斛不同组织中的表达规律。方法采用RT-PCR和RACE等方法获取铁皮石斛HDS(Do HDS)的c DNA全长,利用相关软件和在线网站进行生物信息学分析,使用Real-Time PCR分析Do HDS在不同组织的表达特征,构建原核表达载体p ET-28a(+)-Do HDS,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。结果成功获得Do HDS的c DNA全长序列,Gen Bank登录号为KJ161312,全长2 666 bp,ORF为2 238 bp,编码745个氨基酸。Do HDS在各组织中均有表达,在茎中表达量最高,为原球茎的5倍;SDS-PAGE结果显示诱导产物为1个相对分子质量(82 700)与理论值相符的融合蛋白。结论克隆了Do HDS的c DNA全长序列,探究其在不同组织中的表达模式,建立了原核表达体系,为后续研究Do HDS的功能提供了一定的理论基础。
【作者单位】： 安徽农业大学生命科学学院;
【关键词】： 铁皮石斛 -羟基--甲基--E-丁烯基--焦磷酸合酶 基因克隆 表达分析
【基金】：安徽省教育厅自然科学重点项目(KJ2015A005) 江淮地区大学农业科技服务模式关键技术集成与示范(2013BAD20B09)
【分类号】：S567.239
【正文快照】： 铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo,又名黑节草,多年生草本植物,为兰科第2大属植物。它是一种常用名贵中药[1],至今已有1 500多年药用历史。历代医著如《道藏》《神农本草经》《本草纲目拾遗》等均有记载[2]。《中国药典》2010年版中记载铁皮石斛具有益胃生津、滋

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本文编号：641050