转染人TBX18基因的大鼠心脏成纤维细胞中HCN4蛋白表达、If及对心肌细胞搏动频率的影响观察

发布时间：2017-08-08 22:22

  本文关键词：转染人TBX18基因的大鼠心脏成纤维细胞中HCN4蛋白表达、If及对心肌细胞搏动频率的影响观察

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【摘要】：目的观察转染人TBX18基因的大鼠心脏成纤维细胞HCN4蛋白表达、超极化激活内向离子电流(If)及对心肌细胞搏动频率的影响。方法取新生SD大鼠,断头处死后取心脏,分离培养成纤维细胞及心肌细胞。构建人TBX18基因的腺病毒载体Ad-GFP-TBX18,包装并纯化病毒滴度至1×1010TU/m L。取传代2~5代时对数生长期新生大鼠成纤维细胞分为A、B、C组,培养24 h后A、B组分别转染Ad-GFP-TBX18、腺病毒载体p HBAd-MCMV-GFP(阴性对照),C组不做任何处理。采用RT-PCR法检测各组细胞TBX18 mRNA。采用Western blotting法检测各组超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCN4)蛋白。采用电压钳记录各组细胞超极化激活内向离子电流(If)。将各组细胞与新生大鼠心肌细胞共培养,观察新生大鼠心肌细胞搏动频率。结果 A、B、C组TBX18 mRNA相对表达量分别为98.32±6.21、1.03±0.05、1.02±0.02。A组TBX18 mRNA相对表达量高于B、C组(P均0.05);B、C组TBX18mRNA相对表达量差异无统计学意义。A、B、C组HCN4蛋白相对表达量分别为0.49±1.21、0.12±0.02、0.09±0.01。A组HCN4蛋白相对表达量高于B、C组(P均0.05);B、C组HCN4蛋白相对表达量差异无统计学意义。A组约有30%的细胞可以检测到If,而B、C组中没有细胞检测到If。同一时点A组新生大鼠心肌细胞搏动频率高于B、C组(P均0.05);B、C组新生大鼠心肌细胞搏动频率差异无统计学意义。结论转染人TBX18基因的大鼠心脏成纤维细胞高表达HCN4蛋白,存在If电流,并能促进共培养新生大鼠心肌细胞的搏动。
【作者单位】： 武汉大学人民医院;武汉大学心血管研究所;湖北省心血管重点实验室;十堰市太和医院;
【关键词】： TBX基因 基因转染 成纤维细胞 心肌细胞 超级化激活环核苷酸门控阳离子通道 超极化激活内向离子电流 心脏起博 动物实验
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81270249);国家自然科学基金面上项目(81570306) 湖北省科技支撑计划项目(2013BCB013)
【分类号】：R541.7
【正文快照】： 3湖北省心血管重点实验室;4十堰市太和医院)近年来,缓慢性心律失常的发病率逐年升高。安装心脏起搏器可缓解症状,但起搏器不能随患者情绪变化、激烈运动情况做出自主调节,且有需定期更换电池、易受电磁波干扰及不适合儿童使用等缺点,因此寻找替代疗法生物起搏器逐渐成为了研究

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