成都地区犬源大肠杆菌毒力相关基因、耐药性及系统进化组的研究

发布时间：2017-08-11 04:23

  本文关键词：成都地区犬源大肠杆菌毒力相关基因、耐药性及系统进化组的研究

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【摘要】：为了解成都地区犬源大肠杆菌毒力相关基因、耐药性和系统进化组的分布情况,本研究采集犬肛拭子样本进行了大肠杆菌的分离鉴定,并对临床分离株的13种毒力相关基因进行PCR检测,以及其对常用抗生素敏感性进行测定。采用已建立的PCR方法对β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、氯霉素类、磺胺类的主要耐药基因进行检测,并对耐药性及耐药基因的符合率进行分析。本研究主要取得以下成果:1.通过对175份犬肛拭子样本进行分离鉴定,共分离到156株大肠杆菌。其中104株分离自临床健康犬样本,52株分离自腹泻样本,总分离率为89.14%。血清型鉴定结果表明:犬源大肠杆菌血清型分布散在,无明显优势血清型。除毒力基因cvaC未检出外,fimC、sitA和ompT基因在临床健康分离株和腹泻分离株的检出率均超过40%。腹泻分离株iroN、tsh、iss和hlyA基因的检出率显著或极显著高于临床健康分离株,据此推测,犬大肠杆菌病的发生可能与E.coli所携带的毒力基因有关。2.对156株犬源大肠杆菌对常用抗生素敏感性进行测定。其中,耐药率最高为头孢喹肟和林可霉素,分别为100%和97.4%,其次是氨苄西林和阿莫西林达到73.1%和69.9%,美罗培南和粘菌素耐药最低,为4.5%和5.8%,其它抗生素耐药率在20%~60%。3耐及以上的耐药菌株占95.51%(149/156),7耐所占比例最大(12.18%,19/156),其次为9耐(10.90%,17/156)、14耐(10.90%,17/156)、10耐(9.62%,15/156)和5耐(8.33%,13/156)。3.采用已建立的PCR检测方法,对156株犬源大肠杆菌5类17种耐药基因进行检测,β-内酰胺类耐药基因blaCTX-M、blaTEM检测率最高,分别为89.74%,78.84%;其次是磺胺类耐药基因Sul3检出率为63.46%;喹诺酮类耐药基因aac(6′)-Ib、OqxAB和qnrS检出率分别为18.59%、35.26%和26.92%;氨基糖苷类耐药基因aadA、aacC2、aacC4和aphA3检出率分别为23.07%、55.77%、8.97%和26.28%。对测得的耐药表型和耐药基因进行符合率比较,156株犬源大肠杆菌对氨基糖苷类、β-内酰胺类、喹诺酮类和氯霉素类抗生素药敏耐药表型结果与耐药基因的检测结果有很高的符合率(≥81%),符合率分别为89.15%、100%、81.31%和91.42%。本研究对犬源大肠杆菌β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、氯霉素类、磺胺类5类抗生素主要耐药基因进行检测,丰富了犬源大肠杆菌耐药基因的流行病学资料。4.为进一步了解犬源大肠杆菌菌株的遗传起源及分子特性,采用3重PCR方法对临床分离株进行系统进化组分析。菌株主要分布于A组(35.40%,59/156);其次D组(29.49%,46/156)和B1组(20.51%,32/156);B2组菌株分布最少(12.18%,19/15),B2和D两组肠杆菌占总分离数的41.67%(65/156)。犬源大肠杆菌致病群(B2组和D组)和共生群(A组和B1群)分离菌株对氟喹诺酮类抗生素耐药率差异显著(P0.05)。犬源大肠杆菌毒力相关基因虽在各系统发育均有分布,但B2组的毒力基因平均数高于其他系统进化组。
【关键词】：犬 大肠杆菌 毒力基因 耐药性 耐药基因 系统进化组
【学位授予单位】：西南民族大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.61
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 缩略语表8-12
• 第一章 文献综述12-19
• 1 大肠杆菌的流行情况12-13
• 2 大肠杆菌耐药性研究进展13-16
• 2.1 大肠杆菌的耐药现状13-14
• 2.2 大肠杆菌耐药性的检测方法14-15
• 2.3 大肠杆菌耐药性的消除方法15-16
• 3 致病性大肠杆菌的研究进展16-17
• 3.1 大肠杆菌的血清型16
• 3.2 大肠杆菌系统进化组研究16-17
• 3.3 大肠杆菌毒力因子17
• 4 选题目的、意义和主要内容17-19
• 4.1 犬源大肠杆菌研究存在的问题17
• 4.2 研究目的、意义和主要内容17-19
• 第二章 犬源大肠杆菌的分离鉴定及相关毒力基因PCR检测19-36
• 1 材料19-20
• 1.1 样本来源19
• 1.2 主要试剂19-20
• 1.3 主要仪器20
• 2 方法20-25
• 2.1 犬源大肠杆菌的分离鉴定20
• 2.2 犬源大肠杆菌 16S rRNA基因序列测定20-21
• 2.3 犬源大肠杆菌O抗原血清鉴定21
• 2.4 细菌DNA的制备21
• 2.5 引物来源与合成21-23
• 2.6 犬源大肠杆菌13种相关毒力基因的PCR检测23-25
• 3 结果25-34
• 3.1 犬源大肠杆菌的分离鉴定结果25-26
• 3.2 犬源大肠杆菌 16sRNA基因序列测定26
• 3.3 156株犬源大肠杆菌O血清型鉴定结果26-27
• 3.4 犬源大肠杆菌13个毒力基因的PCR检测结果27-33
• 3.5 犬源大肠杆菌毒力基因的分布33-34
• 4 讨论34-35
• 5 小结35-36
• 第三章 犬源大肠杆菌耐药性及耐药基因的检测36-54
• 1 材料36-37
• 1.1 菌株来源36
• 1.2 抗菌药物36-37
• 1.3 主要试剂37
• 1.4 主要仪器37
• 2 方法37-40
• 2.1 最小抑菌浓度（MIC）测定37-38
• 2.2 耐药基因PCR检测38-40
• 2.3 药敏试验与耐药基因检测的比较40
• 3 结果40-51
• 3.1 最小抑菌浓度测定结果40-41
• 3.2 犬源大肠杆菌耐药谱型分析41-42
• 3.3 犬源大肠杆菌耐药基因PCR检测42-49
• 3.4 犬源大肠杆菌耐药基因型分析49
• 3.5 药敏试验方法与耐药基因PCR检测方法的比较49-50
• 3.6 犬源大肠杆菌耐药表型和耐药基因的符合率比较50-51
• 4 讨论51-52
• 5 小结52-54
• 第四章 犬源大肠杆菌系统进化组的研究54-62
• 1 材料54
• 1.1 菌株54
• 1.2 主要仪器和试剂54
• 2 方法54-56
• 2.1 犬源大肠杆菌系统进化组鉴定54-56
• 2.2 数据分析56
• 3 结果56-60
• 3.1 犬源大肠杆菌系统进化组分型PCR电泳检测结果56-57
• 3.2 犬源大肠杆菌系统进化组分型57
• 3.3 犬源大肠杆菌不同系统进化组别的毒力基因分布57-58
• 3.4 犬源肠杆菌不同系统进化组别药敏结果分析58-60
• 4 讨论60
• 5 小结60-62
• 全文结论与创新点62-63
• 1 全文结论62
• 2 全文创新点62-63
• 参考文献63-69
• 攻读硕士期间发表的论文69-70
• 附录70-73
• 致谢73-74

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本文编号：654224