PRKCI基因在急性心肌梗死患者中低表达及其功能验证

发布时间：2017-08-11 09:11

  本文关键词：PRKCI基因在急性心肌梗死患者中低表达及其功能验证

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【摘要】：目的:通过扩大样本量明确PRKCI基因在急性心肌梗死患者外周血白细胞中低表达,利用RNA干扰技术检测PRKCI低表达大鼠心肌细胞低密度脂蛋白的分泌情况,并对其变化进行分析。方法:(1)随机选取吉林大学中日联谊医院心血管内科2014年11月-2015年1月明确诊断为急性心肌梗死的患者20例为实验组,20例正常者为对照组,所有受试者抽取晨起空腹静脉血6ml。以6ml静脉血为样本进行RNA及蛋白提取,分别从RNA水平及蛋白水平对其进行PRKCI蛋白表达量的检测,并对PRKCI基因进行功能分析。(2)利用RNA干扰技术特异性减低大鼠离体心肌细胞内源性PRKCI基因的表达。用PRKCI干扰载体及空白对照载体分别转染离体大鼠心肌细胞,转染24小时后于倒置的荧光显微镜下初步检测转染效率,转染48小时后分别提取被转染心肌细胞的总RNA及总蛋白,利用RT-PCR及Western Blot方法对其进行PRKCI基因表达量的检测,并分别以GAPDH基因及β-actin基因为内参基因。同时,在转染前、转染后12小时、转染后24小时、转染后36小时、转染后48小时分别留取各转染细胞的培养基,利用Elisa法检测培养基中低密度脂蛋白浓度。结果:(1)两组研究对象在低密度脂蛋白胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇水平上存在明显差异,急性心肌梗死组的低密度脂蛋白胆固醇浓度较高,高密度脂蛋白胆固醇浓度较低。在RNA水平上,急性心肌梗死组PRKCI基因的相对表达量为0.62±0.11(P=0.032);在蛋白水平,急性心肌梗死组PRKCI蛋白的表达量也明显减低。通路分析发现PRKCI基因参与胰岛素通路、血小板激活通路、wnt信号通路等多条信号通路。(2)倒置的荧光显微镜下可见干扰载体及空白对照载体均成功转染至大鼠心肌细胞,且转染效率无明显差异。在RNA水平上,PRKCI干扰组较对照组PRKCI基因的相对表达量为0.3185±0.058(P=0.032);在蛋白水平,PRKCI干扰组较对照组PRKCI基因蛋白的表达量也明显减低。在低密度脂蛋白水平上,PRKCI干扰组的浓度分别为4.043±0.372ug/m L、4.833±0.0898ug/m L、5.324±0.211ug/m L、6.023±0.131ug/m L、5.585±0.569ug/m L,对照组为4.123±0.140ug/m L、4.103±0.311ug/m L、3.987±0.133ug/m L、4.191±0.0716ug/m L、3.891±0.160ug/m L。由此可见,随着时间的推移,PRKCI干扰组LDL水平随时间延长浓度逐步升高,并于30-40小时达到峰值,而对照组LDL未见明显改变。结论:急性心肌梗死患者外周血白细胞中,PRKCI基因低表达。在H9C2细胞中PRKCI基因低表达促进LDL合成。PRKCI基因低表达导致LDL合成增加,可能是诱发急性心肌梗死的原因之一。
【关键词】：心肌梗死 PRKCI基因 大鼠心肌细胞 干扰载体 低密度脂蛋白
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R542.22
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-14
• 第1章 引言14-16
• 第2章 文献综述16-25
• 第3章 研究内容25-53
• 第一部分PRKCI基因在急性心肌梗死患者中表达检测25-40
• 1.1 研究对象25-26
• 1.2 研究材料及设备26-27
• 1.3 研究方法27-36
• 1.4 统计学分析36-37
• 1.5 结果37-40
• 第二部分PRKCI基因在H9C2中的功能研究40-48
• 2.1 研究对象40
• 2.2 研究材料及设备40-41
• 2.3 研究方法41-43
• 2.4 统计学分析43-44
• 2.5 结果44-48
• 第4章 讨论48-52
• 第5章 结论52-53
• 参考文献53-59
• 作者简介59-61
• 致谢61

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 Xuming Dai;Szymon Wiernek;James P Evans;Marschall S Runge;;Genetics of coronary artery disease and myocardial infarction[J];World Journal of Cardiology;2016年01期

2 陈伟伟;高润霖;刘力生;朱曼璐;王文;王拥军;吴兆苏;李惠君;郑哲;蒋立新;胡盛寿;;《中国心血管病报告2014》概要[J];中国循环杂志;2015年07期

3 郭旭东;李相冬;吕晓亮;赵平;姜彦阳;孟繁波;;基因芯片分析急性心肌梗死患者外周血差异基因表达谱[J];中国实验诊断学;2015年06期

4 ;急性ST段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南[J];中华心血管病杂志;2015年05期

5 徐立;杨新春;王乐丰;葛永贵;王红石;李惟铭;倪祝华;刘宇;崔亮;;提前应用替罗非班对急性ST段抬高心肌梗死患者急诊介入治疗疗效的影响[J];中华心血管病杂志;2006年11期

6 ;急性ST段抬高心肌梗死溶栓治疗中国专家共识(2009年版)[J];中华内科杂志;2009年10期

7 马礼坤;余华;冯克福;施有为;张晓红;戴小华;高潮;唐宝龙;程志祥;陈鸿武;夏铭蔚;韩晓萍;叶琪;严激;;急性心肌梗死经转运行直接冠状动脉介入治疗的安全性及临床疗效[J];中华心血管病杂志;2008年06期

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1 许鑫;趋化因子及其受体基因多态性与心肌梗死发生的相关性研究[D];浙江大学;2013年

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