Reelin基因沉默通过GSK-3β上调NR2B的表达加剧神经病理性疼痛

发布时间：2017-08-14 05:06

  本文关键词：Reelin基因沉默通过GSK-3β上调NR2B的表达加剧神经病理性疼痛

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【摘要】：目的观察沉默Reelin的表达对神经病理性疼痛的大鼠的影响,并探讨其可能机制。方法雄性SD大鼠,年龄8-10周,体重200-250 g。66只鞘内置管成功无运动障碍的SD大鼠,采用随机数字表法分为6组:Sham组(n=12)、CCI组(n=12)、RNAi组(n=12)、EV组(n=12)、氯化锂(Lithium chloride,Li Cl)组(n=9)和Li Cl+RNAi组(n=9)。采用右坐骨神经结扎的方法制备慢性坐骨神经压迫性损伤(Chronic constriction injury,CCI)模型,Sham组只暴露右坐骨神经而不结扎。RNAi组和Li Cl+RNAi组于CCI术后第1天鞘内注射Reelin基因RNA干扰慢病毒(LV-Reelin-RNAi)(5μL,1×108 TU/m L),EV组鞘内注射阴性对照病毒(5μL,1×108 TU/m L),其他组给予等容量生理盐水。Li Cl组和Li Cl+RNAi组于手术当天以及术后第1、2、3、4、5、6天,连续7天鞘内注射Li Cl溶液(5μl,4mol/L)。记录并分析CCI术前第1天,术后第1、4、7、10、14、17、21天各组大鼠热缩足潜伏期(Paw withdrawal thermal latency,PWTL)和机械缩足阈值(Paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)。在术后第10天处死大鼠并取腰膨大部脊髓组织,采用免疫组化的方法观察NR2B在脊髓背角的表达部位和表达量;取腰膨大部手术侧脊髓背角组织,采用Western Blot方法检测NR2B、GSK-3β和p-GSK-3β蛋白表达量。结果(1)疼痛行为学变化:CCI术后大鼠手术侧PWTL和PWMT显著性降低(P0.05);从术后第7天开始,RNAi组手术侧PWTL和PWMT进一步下降(P0.05),并一直持续到术后第21天,对侧则无明显影响(P0.05);鞘内注射Li Cl后,从术后第4天开始,PWTL和PWMT明显增加(P0.05)。同时,EV组与CCI组无显著性差异(P0.05)。(2)Western blot结果:CCI术后第10天,手术侧脊髓背角p-GSK-3β/GSK-3β比率减少(P0.05),RNAi后其比率进一步减少(P0.05),鞘内注射Li Cl可明显上调其比率(P0.05);同时,手术侧脊髓背角NR2B蛋白表达增加(P0.05),RNAi后NR2B蛋白表达进一步增加(P0.05),鞘内注射Li Cl可抑制脊髓背角NR2B蛋白的表达上调(P0.05)。而EV组与CCI组无显著性差异(P0.05)。(3)免疫组化结果:NR2B蛋白主要在脊髓背角浅层表达。CCI术后第10天,手术侧脊髓背角NR2B蛋白表达量明显增加(P0.05),RNAi后进一步增加(P0.05),鞘内注射Li Cl可抑制脊髓背角NR2B蛋白的表达上调(P0.05)。结论沉默Reelin的表达加剧神经病理性疼痛,其机制可能与失去对GSK-3β的抑制从而上调NR2B的表达有关。
【关键词】：神经病理性疼痛 NR2B GSK-3β Reelin LiCl
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R741
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 主要缩略语英文索引10-12
• 第1章 前言12-16
• 第2章 材料与方法16-28
• 2.1 材料16-18
• 2.2 方法18-26
• 2.3 统计学处理26-28
• 第3章 结果28-36
• 第4章 讨论36-40
• 第5章 结论40-42
• 参考文献42-48
• 综述 NMDA-NR2B亚基受体与神经病理性疼痛的研究进展48-58
• 参考文献53-58
• 读研期间发表的文章58-60
• 致谢60

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本文编号：670885