线粒体COX基因单核苷酸多态性与肝癌发病风险的相关性研究

发布时间：2017-08-14 18:25

  本文关键词：线粒体COX基因单核苷酸多态性与肝癌发病风险的相关性研究

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【摘要】：目的:原发性肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是一种常见的恶性肿瘤,目前在中国致死性肿瘤中肝癌已跃据第二位,给人民身体素质提升和国民经济发展造成了严重威胁。近年来,越来越多的研究发现线粒体DNA(mitochondria DNA,mtDNA)突变及单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)与肿瘤的发生相关。但研究范围多局限于mtDNA非编码区,少有涉及mtDNA的编码区域。COX片段是位于mtDNA编码区的基因,主要负责编码细胞色素氧化酶(cytochrome oxidase,COX)其中的三个亚基,由于细胞色素氧化酶在线粒体氧化磷酸化过程以及致癌机制中的关键地位,其对应基因区域的突变和多态性也可能与肿瘤发生存在内在联系。SNP是基因组DNA序列中单个核苷酸变异引起的多态性,被广泛应用于多基因疾病的易感基因研究领域。本研究通过对整段COX基因进行DNA扩增、测序,并结合病例-对照统计学方法,找出与肝细胞癌发病风险相关的SNP位点,并分析这些位点SNP与患者临床特征的关系,从而进一步揭示COX基因SNP与肝癌发生发展之间的关系,这将对肝癌易患人群的早期筛查和防治工作带来深远影响。方法:1研究对象及标本采集:其中病例组130例肝细胞癌患者均为2007年9月~2008年3月期间于河北医科大学附属第四医院肝胆外科住院的病人,术前均经免疫学检查及影像学方法临床诊断为原发性肝癌,且术后病理并已被证实为肝细胞癌。健康对照组为2008年10月~2009年4月期间河北医科大学附属第四医院采集的正常人抗凝静脉血标本。2基因组DNA的提取:分离提取肝癌冰冻组织及对照组血样的基因组DNA(DNA纯化试剂盒),提取后置于4℃恒温冰箱中长期保存备用。3 PCR(polymerase chain reaction)扩增COX基因目的片段:在NCBI数据库中查找COX基因所包含的基因片段,包含COI、COII和COIII三段,按600bps左右长度将COX基因划分为9个小基因片段(见Table 2),遵照引物设计原则对每段小基因片段设计PCR上下游引物,后使用PCR预混试剂盒进行扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,放入凝胶成像系统(美国Image公司)证实已扩增出DNA条带,将扩增产物送至生物工程技术有限公司(Shanghai)进行测序。3统计分析:对于计量资料,当n30例时采用t检验(Student's t test),n≥30例采用u检验(u-test);采用χ2检验比较计数资料,并计算P值。实验数据均采用SPSS21.0统计软件进行统计学分析,P0.05被认为有统计学意义。结果:1肝癌组与对照组临床资料对比:年龄、性别在两组之间无显著性差异(P0.05)。2在肝癌组中随机选出30例标本DNA进行扩增、测序,分析后发现6962G/A、7196C/A、7853G/A、8701A/G、8584G/A、8414C/T、9180A/G、9540T/C、9545A/G九个高频率多态性位点(出现频率5%)。对以上多态性位点分布频率进行统计分析发现,肝癌组9545 A/G的SNP分布频率与对照组相比有临界性差异(χ2=5.455,P=0.052)。以上结果说明,该位点的SNP分布频率在肝癌发病风险中具有潜在意义。3对9545A/G所属基因片段的病例数进一步扩大(130例),发现该点的SNP在病例组和对照组间的分布频率有统计学差异(χ2=5.559,P=0.026)。4进一步将9545A/G位点SNP分布和肝癌患者的临床特征进行比较分析,结果显示,9545A/G位点SNP与肝癌患者临床特征,包括性别、年龄、肿瘤长径、肿瘤数目、Child分期、临床分期及门脉瘤栓等均无关(P0.05)。结论:1 mtDNA编码区COX基因上的9545A/G位点SNP与肝癌发病风险相关,该位点SNP可能增加了肝癌的发病风险。2 COX基因的9545A/G多态性改变与肝癌患者临床特征没有相关性,提示COX区9545A/G多态性变异可能是肝癌发生过程中的一个早期事件。
【关键词】：肝癌 mtDNA COX SNPs 发病风险
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-19
• 结果19-21
• 附图21-22
• 附表22-25
• 讨论25-29
• 结论29-30
• 参考文献30-33
• 综述 环氧合酶与原发性肝癌关系研究进展33-47
• 参考文献40-47
• 致谢47-48
• 个人简历48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 Melchiorre Cervello;Daniela Foderà;Ada Maria Florena;Maurizio Soresi;Claudio Tripodo;Natale D'Alessandro;Giuseppe Montalto;;Correlation between expression of cyclooxygenase-2 and the presence of inflammatory cells in human primary hepatocellular carcinoma: Possible role in tumor promotion and angiogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2005年30期

2 Terence C.Tang;Ronnie T.Poon;Cecilia P.Lau;Sheung Tat Fan;;Tumor cyclooxygenase-2 levels correlate with tumor invasiveness in human hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2005年13期

3 ;Specific COX-2 inhibitor NS398 induces apoptosis in human liver cancer cell line HepG2 through BCL-2[J];World Journal of Gastroenterology;2005年02期

4 ;Clinical significance of mrp gene in primary hepatocellular carcinoma[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2003年03期

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本文编号：674077