华山松大小蠹热激蛋白基因克隆与定量表达

发布时间：2017-08-15 01:28

  本文关键词：华山松大小蠹热激蛋白基因克隆与定量表达

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【摘要】：热休克蛋白是一种抗逆蛋白,该蛋白与昆虫对高温和低温的耐受性密切关联,同时热休克蛋白在昆虫生长发育过程中发挥着重要作用。华山松大小蠹是危害我国秦岭巴山林区的重要蛀干性害虫。本研究以华山松大小蠹为研究对象,旨在通过对华山松大小蠹热激蛋白基因克隆和定量表达,研究其在不同温度和不同时间胁迫下热激蛋白基因表达量的差异,揭示华山松大小蠹热激蛋白基因对温度变化的响应与调控作用,初步探讨华山松大小蠹对温度胁迫的适应机制,为华山松大小蠹种群数量动态和可持续控制提供新思路。研究取得的主要结果如下:1.克隆了16条华山松大小蠹热激蛋白基因,其中Hsp70家族8条,Hsp90家族2条,sHsp家族6条,并上传GeneBank并获得登录号。2.华山松大小蠹Hsps基因与赤拟谷盗同源性最高(68%),与其他鳞翅目,膜翅目等昆虫也具有较高同源性,说明Hsps具有高度保守性。3.高温和低温胁迫下华山松大小蠹成虫体内Hsps基因表达变化显著,随着温度的升高或降低,表达量均会上调,但超过一定温度后表达量下降到最初水平;高温胁迫时Hsp70基因变化最显著,低温胁迫时sHsp基因变化显著。4.华山松大小蠹雌虫对温度的敏感度大于雄虫,而雄虫能适应的温度范围更宽;在不同温度和时间处理下华山松大小蠹雄虫体内DAHsp70-8基因表达差异不显著,而在雌虫则差异显著,这说明DAHsp70-8可能与华山松大小蠹雌虫特有的生命活动有关。
【关键词】：华山松大小蠹 热激蛋白 基因克隆定量表达
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S763.38
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 第一章 文献综述9-19
• 1.1 华山松大小蠹研究进展9-11
• 1.1.1 华山松大小蠹的发生与危害9
• 1.1.2 华山松大小蠹的生物学特性9-10
• 1.1.3 华山松大小蠹与寄主华山松的相互关系10
• 1.1.4 华山松大小蠹与共生真菌的相互关系10-11
• 1.2 温度对昆虫的影响11-13
• 1.2.1 温度对昆虫生长发育的影响12-13
• 1.2.2 温度对昆虫地理分布和种群数量影响13
• 1.3 热激蛋白的研究进展13-17
• 1.3.1 诱导Hsps表达的胁迫因子13-14
• 1.3.2 Hsp的分类14
• 1.3.3 Hsp特点14
• 1.3.4 Hsp的基因表达调控14-15
• 1.3.5 Hsp生物学功能15-16
• 1.3.6 热激蛋白的应用16-17
• 1.4 研究内容与目的意义17-19
• 1.4.1 研究目的意义17-18
• 1.4.2 研究内容18-19
• 第二章 材料与方法19-27
• 2.1 供试昆虫19
• 2.2 仪器设备与试剂（试剂盒）19-21
• 2.2.1 主要仪器19-20
• 2.2.2 试剂及药品20
• 2.2.3 引物20-21
• 2.3 试验方法21-24
• 2.3.1 华山松大小蠹总RNA提取21
• 2.3.2 第一链cDNA形成21-22
• 2.3.3 PCR扩增22
• 2.3.4 PCR产物纯化22-23
• 2.3.5 连接与转化23
• 2.3.6 检测与测序23-24
• 2.4 系统发育分析24
• 2.5 Hsps基因的定量表达24-27
• 2.5.1 试验方案设计24-25
• 2.5.2 总RNA提取及cDNA合成25
• 2.5.3 华山松大小蠹定量引物设计与验证25-26
• 2.5.4 实时荧光定量PCR反应26
• 2.5.5 数据分析26-27
• 第三章 结果与分析27-51
• 3.1 华山松大小蠹Hsps基因的克隆与序列分析27-29
• 3.1.1 华山松大小蠹Hsps基因克隆27
• 3.1.2 系统发育分析27-29
• 3.2 华山松大小蠹成虫Hsps实时荧光定量PCR29-33
• 3.2.1 定量引物及退火温度筛选29-31
• 3.2.2 标准曲线的制备31-33
• 3.3 高温胁迫下华山松大小蠹成虫Hsps基因表达量33-41
• 3.3.1 华山松大小蠹Hsp70家族表达量33-36
• 3.3.2 华山松大小蠹Hsp90家族表达量36-38
• 3.3.3 华山松大小蠹sHsp家族表达量38-40
• 3.3.4 小结40-41
• 3.4 低温胁迫下华山松大小蠹成虫Hsps基因表达量41-51
• 3.4.1 华山松大小蠹Hsp 70家族基因表达量41-45
• 3.4.2 华山松大小蠹Hsp 90家族基因表达量45-47
• 3.4.3 华山松大小蠹sHsp家族基因表达量47-49
• 3.4.4 小结49-51
• 第四章 讨论与结论51-55
• 4.1 讨论51-54
• 4.1.1 华山松大小蠹Hsps基因克隆及分析51
• 4.1.2 高温胁迫下华山松大小蠹成虫体内Hsps基因表达水平51-53
• 4.1.3 低温胁迫下华山松大小蠹成虫体内Hsps基因表达水平53-54
• 4.2 结论54
• 4.3 展望54-55
• 参考文献55-60
• 致谢60-61
• 作者简介61

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