SK2和JPH2双基因重组真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

发布时间：2017-08-15 22:15

  本文关键词：SK2和JPH2双基因重组真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

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【摘要】：目的:构建SK2和JPH2双基因重组真核表达载体p IRES-EGFP/SK2+JPH2,并检测其在转染后HEK293细胞中的表达。方法:以p CMV6-entry/SK2为模板,PCR扩增出SK2片段,通过BgⅢ/HindⅢ酶切位点克隆入真核表达载体p IRES-EGFP,将JPH2序列插入构建的SK2表达载体p IRES-EGFP-SK2,并通过酶切及测序鉴定。脂质体转染法将重组质粒p IRES-EGFP/SK2+JPH2转染HEK293细胞,采用Western blot法检测SK2通道蛋白和JPH2蛋白的表达。结果:构建的重组真核表达载体p IRES-EGFP/SK2+JPH2经酶切和测序鉴定,证实插入的序列与Gen Bank中的SK2和JPH2基因序列完全相同。p IRES-EGFP/SK2+JPH2质粒转染HEK293细胞48 h后,SK2和JPH2蛋白均能成功表达。结论:成功构建了重组真核表达载体p IRES-EGFP/SK2+JPH2。
【作者单位】： 郑州大学基础医学院生理学教研室;新乡医学院基础医学院;
【关键词】： SK通道 JPH蛋白 真核表达载体 HEK
【基金】：国家自然科学基金资助项目 81270248;81570311
【分类号】：Q78
【正文快照】： #通信作者,女,1957年10月生,博士,教授,研究方向:心脏生理学,E-mail:qianzhang@zzu.edu.cn小电导-钙激活钾通道(small conductance calci-um activated potassium channel,SK channel)几乎可表达于所有可兴奋细胞[1]。SK2通道是心肌细胞的一种依赖钙离子激活的钾通道,在心肌细

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本文编号：680148