青鱼γ-干扰素基因的克隆与表达分析

发布时间：2017-08-17 04:09

  本文关键词：青鱼γ-干扰素基因的克隆与表达分析

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【摘要】：【目的】开展青鱼γ-干扰素(IFN-γ)基因的克隆、结构特征与表达谱分析研究。【方法】采用cDNA末端快速扩增技术获得了青鱼(Mylopharyngodon piceus)IFN-γ基因cDNA的5′和3′末端序列,然后根据其末端序列设计特异性引物,扩增得到青鱼IFN-γ基因cDNA全长序列,对其序列和编码氨基酸序列进行生物信息学、同源性比较及系统进化树分析,同时对其在青鱼各组织中的表达进行分析。通过构建真核表达载体,将其转染青鱼鳍条组织细胞进行表达分析。【结果】青鱼IFN-γcDNA全长为895bp,其开放阅读框大小为549bp,编码182个氨基酸。氨基酸序列比对分析结果显示,青鱼IFN-γ与人、鸡、鼠IFN-γ的序列相似性仅为1.5%~7.7%,与其他鱼类IFN-γ序列相似性较高,为16.3%~92.9%。青鱼IFN-γ分子N末端包含1个信号肽序列、C末端有IFN-γ特征序列([I/V]-QX-[K/Q]-A-X2-E-[L/F]-X2-[I/V])以及核定位基序(RRRR)。青鱼IFN-γ蛋白二级结构与高等脊椎动物IFN-γ类似,包含7个α螺旋结构。经Poly I:C诱导后发现,IFN-γ在青鱼头肾、肾、脾、皮肤和鳃组织中表达显著上调,最高的为头肾,其次为脾、皮肤、鳃和肾,而在心脏和脑组织中无显著变化。青鱼γ-干扰素真核表达质粒在青鱼鳍条组织细胞中成功表达IFN-γ。【结论】成功克隆了青鱼IFN-γ基因cDNA,经Poly I:C诱导后,该基因在头肾中上调倍数最为显著,青鱼γ-干扰素在体外获得表达。
【作者单位】： 中国水产科学研究院长江水产研究所;湖州师范学院浙江省水生生物资源养护与开发技术研究重点实验室;华中农业大学水产学院;上海海洋大学水产与生命学院;
【关键词】： 青鱼 IFN-γ基因 结构特征 表达分析
【基金】：国家“大宗淡水鱼产业技术体系建设专项”(CARS-46-11) 浙江省水生生物资源养护与开发技术研究重点实验室开放基金项目(SS201403)
【分类号】：S917.4
【正文快照】： 干扰素(IFN)是一类能够诱导脊椎动物细胞产生抗病毒蛋白的分泌型细胞因子,可分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型3种[1]。其中,Ⅱ型干扰素即γ-干扰素(INF-γ),主要由NK细胞产生,也可由单核吞噬细胞及抗原提呈细胞分泌的IL-12和IL-18刺激T淋巴细胞产生[2-4]。IFN-γ能诱导巨噬细胞产生毒性物，

本文编号：687028