遗传稳定型六六六、甲基对硫磷降解基因工程菌的构建及特性研究

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通过转座子介导同源重组的方法,将甲基对硫磷水解酶基因mpd导入到六六六降解菌BHC-A的染色体上,构建了能同时降解六六六和甲基对硫磷的基因工程菌BHC-A-mpd.对其生长特性和降解特性的研究表明,工程菌在LB培养基中的生长特性与原始菌株没有差别,生长至对数期A600 nm值都可达到2.5;对六六六的降解特性和原始菌株相同,可在10 h内将5 mg/L的六六六完全降解.mpd基因在BHC-A-mpd中稳定表

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第 2年第 209 7 7期 08卷月

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遗传稳定型六六六、基对硫降解基因工程菌的构甲磷建及特性研究 陆鹏洪源范洪青，新李顺鹏，,蒋， ( .京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室，京 209; .国科学院南京土壤研究所 1南南 105 2中土壤与农业可持续发展国家重点实验室，京南 200 ) 10 8

摘要：过转座子介导同源重组的方法，甲基对硫磷水解酶基因 m d导人到六六六降解菌 B CA的染色体上，建了能同通将 p H.构时降解六六六和甲基对硫磷的基因工程菌 B CA m d.其生长特性和降解特性的研究表明，程菌在 L H——p对工 B培养基中的生长特性与原始菌株没有差别，长至对数期 A生 值都可达到 25对六六六的降解特性和原始菌株相同，在 1内将 5m/的 .;可 0h gL

六六六完全降解 . p m d基因在 B CA m d中稳定表达，H—— p H ..p B C A m d可以降解多种有机磷类农药 .基因工程菌的构建为六六该六和甲基对硫磷复合污染环境的生物修复奠定了基础 . 关键词：六六；六甲基对硫磷；物降解；因工程菌生基 中图分类号： 1 2文献标识码： 文章编号：2 03 0 ( 0 8 0—9 30 X 7 A 0 5 .3 1 2 0 ) 71 7 -4

Co s r to fa S a l n tc ly En i e e ir o g n s f r De r d ng H CH n t uc i n o t b e Ge e i a l g ne r d M c o r a im o g a i & M e hy r t i n a d Is Cha a t rsi s t lPa a h o n t r c e itc L eg, O G Y a— n, O G Qn,IN i L hnpn U Pn H N unf H N ig~ J G Xn,I u—eg a A S ( . y a oaoy f Mirbo gcl 1Ke L b rtr o coil ia o Enier g gne n Agiut

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A r u ua U i r t, aj g 10 5 C i; .t eK yL b r o f ol n ut nb gi l r,nt t o S i S i c, hns g c l r n esy N n n 0 9, h a 2 S t e a oa r o i ad S s ial A r u ue Ist e f o c ne C ie i tl v i i 2 n a t y S a e ct i l e u e Acd m fSin e, aj g2 0 0 C ia a e yo e c s N ni 10 8, hn ) c n Ab ta tA G M ein td a HC A m d, aa l fsmu a eul erdn fmeh l aaho MP)a d HC a u c sfl sr c: E d s ae s B—— p cp be o i h no sy d ga ig o ty rtin( g p n H w ss cesul y c nt ce yrn o net no eh l aaho yrls e e( p noc rmoo f H—e aigs anB— i emii o su tdb ad m isro f m ty p rtinhdoaeg n m d)it ho smeo HC d g dn t i HC A wt t n— r i a a r r hh Tn t n p s n s se . e go h a d d ga ig c r ce itc fBHC— mpd wa o—r s o o y tm Th wt n e dn haa trsiso a r r A— s c mpae t h rgn lsri r d wih te o ia tan BHC—, n te rs t i A a d h eu l s o d ta hee wa o df r n e i hi t s e t A60 o h we h tt r sn ie e c n t s wo ap cs, 0 fBHC— m, n LB me i m o l e c 5 i o aih cp ro wh c s A— a i d u c ud r a h2. n lg rt mi e d, ih wa i te s me a h to h rgn tan BHC— . h a sta fte o i a sr i i l A BHC— mp h we

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id c td ta n iae h tBHC— mp wa rmiig GEM n boe dain o A— d sa po sn i ir me it fMP n o a d HCH o c n a n td e vr n n . c - o tmi ae n io me t

Ke r s HC meh lprtin MP; id ga ig g n t al e gnee co ra i ywo d: H; ty aaho ( ) bo e dn;e eil y nierd mirogns r c ms

六六六 ( C )一种脂溶性的有机氯农药 . H H是它主要有 a J 7艿4种立体异构体，中 7异构体具有、、、 3其杀虫效力… .虽然从 2 O世纪 8 O年代以后，部分发大达国家和部分发展中国家已禁止使用六六六，由但 于其半衰期长，目前仍是国内外环境部门监控的主

以在菌株中引入新的降解性状，加降解菌的功能，增 降低生产和使用成本，污染环境生物修复提供优为 良菌株 .研究将编码甲基对硫磷水酶的基因本

m d,过基因工程的手段导入六六六高效降解 p通 菌 Shn o o a p B C A( H . ,建 1株具 p i m n ss . H . B CA)构 g

要对象 .有机磷农药是继六六六以后的又一种主要 农用杀虫剂，甲基对硫磷是其主要品种之一 .它在为

有降解六六六及有机磷农药双重功能的工程菌，，以期为六六六和有机磷农药复合污染环境的生物修复 奠定了基础 .

农业生产提供高效杀虫性能的同时也带来了严重的负面影响 .留在土壤中的有机磷农药不仅会减弱残 土壤的正常生产能力，会对人类的健康造成危还

害 .生物降解是一种环境友好型污染物去除方微式 .研人员已分离到六六六降解菌株科对硫磷降解菌株和甲基，且克隆了甲基对硫磷水解并

收稿日期：0 70—6 2 0—72;修订日期：0 7 0— 1 2 0 .9 1基金项目：家自然科学基金项目 (000 3;苏省科技厅项目国 340 1 )江 ( G 052 )江苏省教育厅项目 (} D 62;国博士后 B 20 32; J{ o— )中 Z

酶基因 m d p,是还没有分离到能同时降解甲但 基对硫磷和六六六的菌株 .过基因工程的手段可通

科学基金项目(o 5377;苏省博士后科研计划项目 2o07 4)江 作者简介：陆鹏 (96~)男，士研究生， 18,硕主要研究方向为环境微生物学 . *通讯联系人。— alh nqn na@y ho cm.a E m i:o g igju ao .o c

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