利用实时荧光定量PCR法检测转基因水稻外源基因拷贝数的研究

  本文关键词：利用实时荧光定量PCR法检测转基因水稻外源基因拷贝数的研究，由笔耕文化传播整理发布。

利用实时荧光定量PCR法检测转基因水稻外源基因拷贝数的研究(1)

     摘 要：转基因植物中外源基因拷贝数是影响目的基因表达水平和遗传稳定性的重要因素，因此外源基因拷贝数的检测成为转基因研究的关键，利用高通量、快速、灵敏的SYBR Grcen I荧光定量实时PCR法，检测了转大麦烟酰胺合成酶基因(NAS1)水稻中外源基因拷贝数，以蔗糖磷酸合成酶基因(SPS)作为水稻的内源参照基因，通过梯度稀释法，分别获得了NA51和SPS基因的Ct值与起始模板数的相关性标准曲线，相关系数分别为0.99976和0.99571，相关性高，通过目的基因NASl和水稻內源参照基因SPS起始模板数的比较，获得了目的基因在转基因水稻中的拷贝数，在8株转基因株系中，1株为假阳性，1株拷贝数为1，，3株拷贝数为2，其余3株拷贝数分别为3、4和7，而阴性对照拷贝数为0，这种方法快速、简便、准确，可以满足转基因育种工作中对后代优良株系的选择。

    关键词：SYBR Creen I实时荧光定量PCR；烟酰胺合成酶基因；转基因水稻；拷贝数

    中图分类号：Q503 文献标识码：A 文章编号：1007-7847(2007)04-0301-05

    植物遗传转化是作物改良和新基因功能鉴定的常用方法 ......

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