RIPK3基因转染的SH-SY5Y细胞中HIF-1α基因及其信号通路相关基因表达变化

发布时间：2017-08-22 12:27

  本文关键词：RIPK3基因转染的SH-SY5Y细胞中HIF-1α基因及其信号通路相关基因表达变化

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【摘要】：目的观察受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)基因转染的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及其信号通路相关基因表达变化。方法构建表达RIPK3基因的p CMV6-AC-GFP质粒(重组质粒),培养SH-SY5Y细胞,分为实验组及对照组,分别转染重组质粒和空载质粒。采用Western blotting法检测细胞中的RIPK3蛋白,分别于培养8、14、20、26、32、38 h后,通过MTT实验检测细胞增殖情况(OD值)。采用转录组测序技术(RNAseq)及Ingenuity Pathway Analysis(IPA)软件检测并筛选RIPK3-HIF1α下游信号通路中的关键基因。采用微滴式数字PCR(dd PCR)检测两组细胞中的HIF-1αmRNA。结果实验组细胞中RIPK3蛋白相对表达量(0.806±0.097 5)高于对照组(0.455±0.088 6),P0.05。随培养时间延长,实验组细胞增殖受到抑制。实验组细胞中HIF-1αmRNA相对表达量(0.015 43±0.003 47)低于对照组(0.046 28±0.010 26),P0.05。在HIF-1α为核心的相互作用关系网络中,筛选出关键分子泛素缀合酶样蛋白(UBC)、希佩尔-林道蛋白(VHL)、转录延伸因子B多肽1(TCEB1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)。结论 RIPK3基因转染SH-SY5Y后,细胞中HIF-1αmRNA表达下调,同时HIF-1α信号通路相关基因(UBC、VHL、TCEB1、VEGFA)的表达水平受到影响。
【作者单位】： 武警后勤学院附属医院脑科医院;武警后勤学院中心实验室;
【关键词】： 神经母细胞瘤 受体相互作用蛋白激酶 低氧诱导因子α 泛素缀合酶样蛋白 希佩尔-林道蛋白 转录延伸因子B多肽 血管内皮生长因子A
【基金】：国家自然科学基金项目(31200809) 武警部队后勤科研项目(WJHQ2012-20)
【分类号】：R739.4
【正文快照】： 受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)属于受体相互作用蛋白家族(RIPs)成员。作为肿瘤坏死因子(TNF)重要的下游效应分子,RIPK3广泛表达于人体各组织,并被证实在细胞增殖、凋亡过程中发挥重要作用[1~4]。低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达于所有已知的多细胞物种[5],是组织适应缺氧环境的

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本文编号：719171