BT杀虫毒素Cry3A与黄粉虫中肠BBMV结合特性的研究

发布时间：2018-04-18 15:52

  本文选题：苏云金芽孢杆菌 + Cry3A蛋白　； 参考：《河北科技师范学院》2015年硕士论文

【摘要】：Cry3A蛋白是苏云金芽孢杆菌在芽胞产生时期分泌的一种δ内毒素,可以特异性杀死鞘翅目昆虫。本研究通过表达含有α-胰凝乳蛋白酶酶切位点的Cry3A突变体蛋白Cry3Am,获得Cry3A毒蛋白杀虫活性核心片段aCry3A,验证Cry3A毒素致死过程中多聚体离子通道的存在,探究Cry3A毒素非核心区域α1-α3的作用,并寻找增加Cry3A杀虫活性的办法。具体方法如下:将实验室保存的pET28a-cry3am质粒转入感受态细胞,表达突变体Cry3Am3蛋白;用α-胰凝乳蛋白酶对Cry3Am进行酶切后获得了55kD的有毒核心片段;参考鳞翅目昆虫刷状缘膜囊泡(BBMV)的MgCl2沉降提取法,成功分离到了黄粉虫的BBMV;通过Western Blot对Cry3A会在BBMV上形成多聚体蛋白通道假说进行验证;将毒素与黄粉虫复合配方饲料混合饲喂给刚孵化的黄粉虫幼虫,评价突变体蛋白Cry3Am的致死性,探究非核心区域α1-α3片段的作用。其结果为化学发光后Western Blot形成的照片中活性片段aCry3A在110kD,165kD,225kD区域形成了阴影;在饲养复合饲料中混合0.12%毒素的情况下,Cry3Am的致死率为22.6%,aCry3A的致死率为24.1%,Cry3A的致死率为3.7%。本文通过对Cry3A与黄粉虫中肠BBMV结合特性的研究发现Cry3A毒素在致死过程中会形成多聚体蛋白通道,破坏昆虫中肠细胞渗透压平衡,Cry毒素非核心区域α1-α3片段对多聚体蛋白通道的形成没有任何影响;在核心区域aCry3A和非核心区域α1-α3之间可以插入α-胰凝乳蛋白酶酶切位点的突变体蛋白Cry3Am可以提高Cry3A毒素的杀虫活性。
[Abstract]:Cry3A protein is a kind of 未 endotoxin secreted by Bacillus thuringiensis during the period of spore formation, which can specifically kill Coleoptera insects.In this study, Cry3A mutant Cry3Amwith 伪 -chymotrypsin was expressed to obtain the core fragment of Cry3A toxic protein insecticidal activity, aCry3A, to verify the existence of polymeric ion channels during the lethal process of Cry3A toxin.To explore the role of 伪 1- 伪 3 in the non-core region of Cry3A toxin and to find ways to increase the insecticidal activity of Cry3A.The specific methods were as follows: the pET28a-cry3am plasmid preserved in the laboratory was transferred into the receptive cells to express the mutant Cry3Am3 protein, and the toxic core fragment of 55kD was obtained after Cry3Am was digested with 伪 -chymotrypsin.Referring to the MgCl2 sedimentation method of Brush border vesicle (BBMV) of Lepidoptera insects, the Western Blot was used to verify the hypothesis that Cry3A would form a polymeric protein channel on BBMV.The toxin and the compound formula feed of powdery mildew were fed to newly hatched larvae of Molitor Molitor to evaluate the lethal effect of mutant protein Cry3Am, and to explore the role of 伪 1- 伪 3 fragment in non-core region.The results showed that the active fragment aCry3A formed by chemiluminescent Western Blot had a shadow in the 110kDX 165kDU 225kD region, and the mortality of Cry3Am was 22.6cm Cry3A when mixed with 0.12% toxin in the compound feed. The mortality rate of Cry3A was 24.1kD3 A (3.7kD).In this paper, we studied the binding characteristics of Cry3A to BBMV in the midgut of powdery mildew. We found that the Cry3A toxin forms a polymeric protein channel during the lethal process.Destroying the osmotic balance of insect midgut cells and destroying the 伪 1- 伪 3 fragment of the non-core region of Cry toxin had no effect on the formation of polymeric protein channels.Cry3Am, a mutant protein with 伪 -chymotrypsin restriction site inserted between the core region aCry3A and non-core region 伪 1- 伪 3, could increase the insecticidal activity of Cry3A toxin.
【学位授予单位】：河北科技师范学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S476.1

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本文编号：1769032